ELISA试剂盒实验前设置

在进行正式的ELISA实验之前，有必要进行预实验。 预实验的目的是初步探究实验条件，如最佳抗原包被浓度、酶标记二抗的稀释比例、底物显色时间等，并对实验的可行性进行初步评估。

1.设置抗原包被浓度。

将抗原溶液分别以1g ml、2 g ml、4 g ml、8 g ml和16 g ml的浓度稀释在抗原包衣溶液中。 随机选择等量的特异性抗体血清与抗原溶液反应，在37下孵育1小时后洗涤，再加入酶标记的二抗，孵育30分钟清洗，最后加入底物显色，反应终止后，用酶标仪在450nm波长处测定各孔的光密度值。 绘制 ROC 曲线以找到截止值。

其次，确定酶标记二抗的稀释比例。

将已知的阳性和阴性血清样品用ELISA稀释液稀释，将特异性抗体稀释到不同浓度的酶标记的二抗溶液中，与包被的抗原一起孵育，洗涤后再加入底物显色，最后用酶标仪测定光密度值。 绘制 ROC 曲线以找到截止值。

3.确定基材的显色时间。

在微孔板上设定显色时间5 min、10 min、15 min和30 min，观察不同显色时间对实验结果的影响。 在显色过程中，房间应远离光线，以免影响结果的准确性。

通过以上三个方面的实验前设置，可以对ELISA实验条件进行初步探索和优化，可为后续的形式化实验提供可靠的依据。 同时，还可以及时发现实验中的问题，做出有针对性的改进，提高实验的准确性和可靠性。 在正式实验中，可以根据已经探索过的条件进行操作，提高了实验的重现性和成功率。