一、操作步骤。
1.准备试剂。
根据需要制备适量的ELISA试剂盒,包括抗体、酶标记的二抗、标准品等。
2.准备标准溶液。
标准品按说明书上的要求进行稀释,一般采用双稀释法配制不同浓度的标准溶液。
3.配药。
将待供试样和标准溶液加入相应的微孔板中,按说明书上的试样用量加入相应的体积。
4.孵化。
密封微孔板并将其置于37°C一段时间,通常为1-2小时。
5.洗。
洗涤是ELISA实验中非常重要的步骤,需要根据说明书上的说明进行正确的洗涤操作。 洗涤的目的是去除未结合的材料并减少非特异性干扰。
6.添加酶标记的二抗。
洗涤完成后,加入酶标记的二抗,并根据说明书上添加的样品量加入相应体积。 然后再次密封微孔板,将其置于37°C一定时间。
7.洗。
与步骤 5 相同,执行正确的洗涤操作。
8.加入底物溶液。
洗涤完成后,加入底物溶液,并按说明书上的样品量加入相应体积。 然后将其置于室温下并在黑暗中孵育一定时间。
9.终止反应。
加入终止液以终止反应。 通常使用硫酸作为终止液。
10.检测读数。
在酶标仪上读取每个孔的光密度值并记录数据。 根据标准溶液的浓度和光密度值绘制标准曲线,然后根据待测样品的光密度值在标准曲线上计算浓度。
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