CDK5重组蛋白调节细胞周期

1.蛋白质基本信息：

细胞周期蛋白依赖性激酶 5 （CDK5） 是一种丝裂原活化蛋白激酶，参与调节细胞周期和神经发育等生物过程。 它与细胞周期蛋白I结合形成活性复合物。

CDK5 蛋白含有 293 个氨基酸，分子量约为 33 kDa。

2.基因克隆：

具有全长 CDK5 序列的引物旨在扩增人类的 CDK5 基因。

将扩增的CDK5基因克隆到表达载体（如PET28A）中，并进行测序验证。

货号聚α烯烃1000-5635

3.表达宿主文化：

将CDK5重组质粒转化为表达大肠杆菌的宿主细菌，如BL21（DE3）。

在无菌条件下，通过挑选单个菌落在培养基（例如，Luria-bertani，LB）中生长并孵育过夜。

4.诱导表达：

将过夜培养液转移到含有适当浓度的IPTG（异丙基-D-硫代半乳糖苷）的培养基中，并继续培养4-6小时。

收集细菌溶液，并通过离心沉淀细菌。

5.细胞破碎和蛋白质提取：

细胞沉淀通过超声处理或其他方式破碎，释放蛋白质。

使用合适的缓冲液提取CDK5蛋白。

6.亲和纯化：

提取的蛋白质样品通过亲和层析纯化。

CDK5 可以使用亲和柱（如镍柱 （Ni2+））根据标记蛋白的特异性结合进行纯化。

7.电泳分析：

使用聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS-PAGE） 分析纯化的 CDK5。

通过Western blot等技术检测蛋白的纯度和表达水平。

8.蛋白质活性分析：

纯化的CDK5的酶活性分析可以使用典型的底物匹配激酶反应系统进行。

将 CDK5 活性与参考文献中的结果进行比较，以验证重组蛋白的功能。