1.基本信息：
CldN11 （Claudin 11） 是一种细胞间连接蛋白，主要在中枢神经系统中发挥作用。 它在髓鞘细胞中表达，并参与维持神经纤维髓鞘的结构和功能。 为了更好地了解CLDN11的功能及其与神经系统疾病的关系，我们设计了以下实验方案。
2.基因克隆：
首先，从人脑组织中提取总RNA，并使用逆转录酶将mRNA转录为cDNA。 然后，设计特异性引物以扩增PCR反应中ClDN11基因的全长。 用适当的质粒载体酶切扩增的产物并连接以构建重组质粒。
货号聚甲酰胺1000-5546
3.转化大肠杆菌：
将重组质粒转化为大肠杆菌，并在LB琼脂平板上筛选阳性菌落。 通过PCR和限制性酶切鉴定正确的重组质粒。
4.重组蛋白表达：
从阳性菌落中挑选单个克隆，并在 37 振床上在 LB 培养基中预孵育过夜。 取其中一种预培养菌株，放入含有适量LB AMP（含适量抗生素）的培养基中，重新孵育至OD 600达到06-0.8。加入IPTG（异丙基--D-硫代半乳糖苷）至终浓度为05 mm，继续在低温下孵育 12-16 小时（例如，16 小时）以诱导 CLDN11 重组蛋白的过表达。
5.重组蛋白的纯化：
IPTG诱导后，收集细菌沉淀，并用洗涤缓冲液悬浮细胞沉淀。 使用超声波破坏技术破坏细胞以释放包括 clDN11 在内的细胞蛋白。 离心除去细胞膜和破碎细胞，用his-tag亲和树脂等亲和层析柱纯化上清液，除去杂质。 使用BCA等蛋白质检测方法洗脱重组蛋白并测定蛋白质浓度。
6.功能评估：
通过转染人髓鞘细胞（如Olig2细胞系）或大鼠髓鞘细胞系，免疫细胞化学或免疫共沉淀法检测ClDN11蛋白在细胞间膜上的表达。 此外，CLDN11对髓鞘结构和髓鞘功能的影响可以通过髓鞘形成试验、细胞粘附试验、传导速度试验等方法对转染细胞进行评估。
通过上述实验设计，我们将能够获得纯化的CLDN11重组蛋白，并对其功能进行初步评估，进一步揭示其在神经系统中的重要作用及其与神经系统疾病的关联。