基本信息:
基因名: KIM1
基因大小:约1500 bp
蛋白质分子量:约39 kDa
亚细胞定位:膜蛋白,主要位于卷曲小管附近的上皮细胞上。
货号聚α烯酸1000-5533
概述: 在本实验中,我们将使用细菌表达系统成功制备重组形式的肾损伤分子 1 (KIM1) 蛋白,并对获得的重组蛋白进行初步功能研究。 KIM1 是一种膜蛋白,在损伤过程中高度表达,被认为在再生和损伤修复中起重要作用。
实验设计:1基因克隆:
通过PCR从人肾cDNA中扩增Kim1基因的全长序列,并克隆到适当的表达载体中。
2.细菌表达:
将构建的KIM1表达载体转化为大肠杆菌(E.)。大肠杆菌)表达宿主菌株和Kim1蛋白表达正常的单克隆菌株采用Montatin筛选。
3.蛋白表达和纯化:
将表达Kim1的菌株在适当的培养基中培养,诱导表达后收获细菌细胞,通过超声裂解等手段提取Kim1蛋白,并采用亲和柱层析等技术纯化蛋白。
4.鉴定和定量:
采用SDS-PAGE和Western blot对纯化的Kim1蛋白进行分子量测定和纯度鉴定。 使用 BCA 或其他适当的蛋白质定量方法确定 Kim1 蛋白的浓度。
5.生物功能研究:
a)抗原性测定:通过ELISA等方法验证KIM1蛋白的抗原性,并将其应用于动物实验或体外细胞实验。
b)结构和功能研究:通过晶体学等方法,分析KIM1蛋白的分子结构及其可能的功能区。
c) 肾损伤相关研究:通过尿液样本等检测KIM1蛋白在肾损伤早期诊断和监测中的潜在应用。
摘要:通过利用细菌表达系统成功制备重组KIM1蛋白并进行初步功能研究,可以进一步了解KIM1蛋白在肾损伤和修复过程中的作用机制,为肾脏疾病的早期诊断和改善提供新的线索。
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