基于蛋白质SUMO的常用检测方法

蛋白质 SUMOLATION 是一种重要的翻译后修饰过程，涉及小泛素样修饰蛋白 （SUMO） 与靶蛋白的共价结合。 相聚化在许多生物过程中起着重要作用，例如核转运、转录调控、细胞周期进程和应激反应。 以下是检测蛋白质相扑化的常用方法：

1.western blot：

使用特异性抗SUMO抗体，可以直接检测经过SUMO修饰的蛋白质。 Sumoization通常会导致蛋白质分子量的增加，这可以在电泳分离后观察到。

2.免疫沉淀 （IP） + 蛋白质印迹：

首先用特异性抗体从细胞裂解物中沉淀目标蛋白，然后使用抗 SUMO 抗体通过蛋白质印迹检测 SUMO 状态。

3.亲和纯化后的质谱分析：

通过对SUMO结合位点进行亲和纯化，可以从复杂样品中富集SUMO基化蛋白，然后使用质谱法进行鉴定。

4.生物发光共振能量转移 （BRET）：

细胞内检测相扑的动态过程。 它通常涉及将荧光蛋白和荧光蛋白标签分别附着在靶蛋白和 SUMO 上，然后通过测量两者之间的能量转移来检测它们的相互作用。

5.共聚焦荧光显微镜：

使用荧光标记的SUMO和目标蛋白，可以直接在细胞内可视化基于SUMO的修饰的位置和动力学。

6.酶联免疫吸附测定 （ELISA）：

使用特异性抗SUMO抗体，可以定量SUMO蛋白。