蛋白质翻译后修饰组学中的平行反应监测(PRM)方法

小夏 教育 更新 2024-02-24

蛋白质翻译后修饰(PTM)组学是一门研究蛋白质翻译后修饰的整体状态和动态变化的学科。 它涉及多种PTM类型,如磷酸化、乙酰化、相扑、泛素化、甲基化等。 为了高效、准确地检测和定量蛋白质的PTM状态,质谱技术,特别是平行反应监测(PRM)等靶向质谱方法已被广泛应用。

平行反应监测 (PRM) 是一种靶向质谱策略,用于高选择性、灵敏度和准确的 PTM 定量。 以下是关于蛋白质翻译后修饰组学中PRM的一些关键要点:

1.工作原理:

PRM策略使用高分辨率和质量精确的仪器来监测特定的母子离子对。 这意味着在质谱实验中只能检测到预先选择的特定 PTM 位点或肽。

2.样品制备:

样品通常被消化,然后根据特定的PTM富集,例如使用金属亲和色谱法的磷酸化肽。

3.针对:

PRM 是一种靶向策略,需要事先了解要监测的目标 PTM 肽。

4.定量能力:

通过测量预选肽中的特定破碎离子,PRM可提供高度准确的定量信息,通常与内标肽结合使用以提高定量准确性。

5.应用:

PRM 适用于验证非靶向质谱实验中发现的 PTM 或生物样品中的精确定量。

6.与 SRM MRM 的比较:

PRM 类似于选择性反应监测 (SRM) 或多反应监测 (MRM),但 PRM 通过使用高分辨率仪器检测所有可能的破碎离子来提供更多信息。

PRM 为蛋白质 PTMOMICS 研究提供了强大的工具,尤其是在需要高度定量准确性和可重复性的情况下。 它已被广泛应用于各种生物样本和疾病模型中,以揭示PTM的功能和调控机制。

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