除非另有说明,否则液相色谱柱原液为评估报告中所示的流动相。 使用前,需要注意的是,液相色谱柱的储备溶液与待分析样品的流动相可混溶。 在反相色谱中,如果使用高浓度的盐或缓冲液作为洗脱液,应用低浓度的10%左右的有机相淋洗液进行过渡,否则缓冲液中的盐分在高浓度有机相中容易沉淀而堵塞柱。
液相色谱柱会导致色谱柱压力增加的原因有很多
1.流动相的预处理。
杂质堵塞色谱柱入口过滤器,导致压力升高。 这通常是由于流动相未过滤,或过滤但未过滤,使固体杂质留在滤板上造成的。
2.样品的沉淀。
当溶解样品的溶剂与流动相不一致时,样品进入色谱柱,有时会因溶解度降低而析出,导致压力增加。
3.晶体的析出。
当使用含缓冲液的流动相时,缓冲液中的无机盐可能会残留在系统中,并且由于在新流动相中的溶解度降低,它们会沉淀,从而导致流体阻力增加和压力增加。
4.细菌或霉菌滋生。
霉菌在流动相、管路或色谱柱入口处生长,堵塞滤板,导致压力增加。 因此,在使用磷酸盐缓冲液时,一般需要当场配制和使用。
5.溶质吸附。
当溶质强烈吸附在色谱柱上并且所使用的流动相难以洗脱时,积聚的未洗脱溶质也会导致阻力增加和压力增加。
6.流动相更换太快。
在更换流动相体系时,非*的改变会导致同一体系中存在不同的不混溶流动相,这也会导致压力增加。
7.压力脉冲。
在运行过程中,系统内的压力有时会突然增加和减少。 这样形成的压力脉冲会引起多孔填料的坍塌和柱床结构的微小变化,填料中微芯片的长期积累也可能增加柱床的阻力,导致压力增加。
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