蓝白斑点筛选重组体的实验原理

将重组体引入受体细胞后，经过短时间的培养扩增后，可用于进一步的筛选和鉴定。 筛选是指通过特定方法从转化的细胞群或基因文库中鉴定重组DNA分子的阳性克（重组）的过程。 选定的阳性克隆可以通过增殖获得所需基因片段的大量拷贝，并通过进一步鉴定最终确定其正确性，为其后续研究奠定基础。

除了抗生素耐药性筛选外，蓝白筛选也是分子克隆中常用的方法：当外源DNA插入载体LACZ标记基因中，导致-半乳糖苷酶基因失活时，可以直接观察到添加X-gal-IPTG的培养基中大肠杆菌转化体菌落的颜色变化。

半乳糖苷酶将乳糖水解成半乳糖和葡萄糖，当宿主细胞在补充有X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷）和乳糖诱导剂IPTG（异丙基--D硫代半乳糖苷）的培养基中培养时，基因互补形成的功能性半乳糖苷酶可将培养基中的无色X-gal裂解成半乳糖和深蓝色底物5-溴-4-氯-靛蓝，使菌落出现蓝色反应。 然而，当外源DNA插入载体lacz标记基因内的多个克隆位点时，-半乳糖苷酶基因的读码结构可以被阻断，其编码的肽变得无活性，从而产生白色菌落。 因此，基于半乳糖苷酶的这种显色反应，可以检测到含有外源DNA插入的重组克隆。