poly(a) 尾是真核生物 mRNA 上的一个特征,它由多个腺苷酸组成,位于 mRNA 的 3 处'结束。 Poly(a)尾部在基因表达的调控中起着重要作用,特别是在mRNA稳定性的翻译和控制中。 mRNA 3' 末端的多聚尾阻止核酸外切酶与 mRNA 3 配对'末端降解,增加mRNA的稳定性。 此外,polya 在翻译过程中充当“翻译增强剂”。 研究表明,去除 polyA 位点可使 mRNA 表达水平降低多达 10 倍。 多聚腺苷酸化信号需要3个部分:多聚腺苷酸化信号序列5'-aauaaa-3'; 剪接位点和尾部位点 ya; 下游保守序列,如富含 u 或 (g+u)-富集。
除了多聚尾信号外,真核基因表达载体元件还包括选择性标记基因和报告基因
选择性标记基因是表达载体的重要组成部分,通常编码正常细胞中不存在的酶。 虽然在选择压力下可以从少量转化细胞中分离出未转化的细胞,但选择标记基因的应用也有其自身无法克服的缺点。 例如,当转化的细胞已经含有抗性基因作为标记基因时,在引入第二个外源基因时会使用不同的选择标记基因,而选择标记基因的实际应用非常有限。 此外,从健康和安全的角度来看,选定的标记基因及其产物在使用时可能有毒或致敏。 因此,在转基因转基因中,去除选择标记基因有利于提高转基因的食品安全性和环境安全性,也可以对同一个受体细胞进行多次转基因操作。 目前,已经开发出一些去除选择标记基因的转化技术,如位点特异性重组系统、选择标记基因的组织特异性表达、共转化、基因组中转移基因的重新定位以及通过转座子进行靶基因替换等。
报告基因主要起到报告基因和识别的作用,其表达产物对受体细胞无毒,能反映外源基因在受体细胞中的表达水平。
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