细胞增殖是指细胞在循环调节剂的作用下发生复制、转录、蛋白质合成等复杂反应的过程。 其中,核DNA的复制增殖是整个过程的重要特征。
测量细胞存活和增殖的方法可以通过三种方式使用:
细胞数量的变化。
细胞数量由细胞活力或 DNA 计数反映;不适用于多种细胞;适用于高吞吐量,少信息;
DNA 信号转导。
掺入DNA分子(brdu或edU),反应DNA**;适用于成像平台,信息准确;操作复杂,产量低;
染料渗透到亮度中。
染料与细胞一起分布到子细胞中;适用于活细胞;适用于流式细胞术或成像平台;结合标记物,可以分析复杂样品中的信息。
以下是细胞增殖测定的几种常用方法:
3H-TDR(3H-胸腺嘧啶核苷)掺入方法。
胸腺嘧啶核苷(TDR)是DNA合成的前体,S期细胞不断吸收TDR来合成DNA。 3H-TDR掺入法是在DNA合成阶段将放射性标记的3H-TDR掺入细胞中,细胞中3H-TDR掺入量可以客观地反映细胞复制DNA能力的大小,从而间接了解细胞增殖情况。 这种方法操作复杂,试剂中含有同位素,具有放射性,对实验者有一定的危害。
MTT(四甲基唑)法。
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色晶体,并将其沉积在细胞中,而死细胞则不具有此功能。 二甲基亚砜DMSO可以裂解细胞中的甲瓒。 采用酶联免疫分析仪测定光吸收值,可间接反映活细胞数。 在一定的细胞数范围内,形成的MTT结晶量与细胞数成正比。 该方法简单、灵敏、无放射性。
MTT溶液需要在避光4倍处储存,最好准备立即使用。 MTT还原生产的产品不溶于水,不能直接测定吸光度,需要溶解后方可检测。 MTT方法只能用于测量细胞的相对数量和相对活力,而不能用于测量细胞的绝对数量。
CCK-8(Cell CountingKit-8)方法。
CCK-8试剂含有WST-8,WST-8是一种水溶性四唑盐,在电子偶联试剂存在下,可被线粒体中的脱氢酶还原生成橙黄色甲瓒产物,细胞增殖越快,颜色越深。 与MTT方法相比,CCK-8更易于操作,并且具有更好的灵敏度、准确性和重复性。 更重要的是,CCK-8方法细胞毒性低,细胞检测后可重复使用,实用性更好。