用于细菌细胞基因电转移的电转换仪器实验方案

尽管细菌细胞具有细胞壁，但实验表明它们不会对基因电转移形成屏障。 因此，目前大多数基因电转移实验都使用完整的细胞而不是分离的原生质体。 下面以大肠杆菌基因电转移为例，介绍其基因电转移实验步骤。

1.细胞培养。

将大肠杆菌单克隆接种到LB生长缓冲液中，并在摇晃下生长过夜以生长至稳定阶段。 第二天，将其稀释 100 倍，并在细胞生长到对数生长期（例如，JM105 的 OD600 为 0）时继续振荡 37 年。5 1），将细胞悬浮液置于4下15分钟。

2.实验细胞的制备。

将冷却的大肠杆菌细胞悬浮液以4,000g在4°C下离心10分钟。 然后，除去上清液，用电穿孔溶液（PM溶液）洗涤细胞2-3次，并根据实验需要用该溶液将细胞重悬至指定浓度，例如5x10ml，并将其保持在冰上以备后用。

3.实验前的预培养。

将DNA加入指定量（例如，10ngml）的人实验细胞样品中，在涡旋搅拌下将DNA与细胞充分混合，并将混合物置于冰上静培养5分钟。

4.电场处理。

将样品注入电穿孔室（预冷至0 4）并施加指定的电场（电场强度，脉冲宽度，脉冲数和最佳电场条件的时间间隔）。