介质无法正常凝固的原因及解决方法

1. 琼脂知识

琼脂，也被称为琼脂或冷冻粉，也被称为“海藻”，因为它最初是从日本海藻中提取的。 成品琼脂为白色或淡黄色粉末或细条状，主要由复杂的大分子多糖组成。 其水解产物由40%D-半乳糖、3%硫酸盐和2%丙酮酸组成，实际上，它是琼脂胶和琼脂糖两种成分的混合物。 琼脂糖是琼脂糖的硫酸酯，主要依靠氢键的引力形成网络结构。 因此，琼脂糖凝胶的稳定性略低于通过交联化学键形成网络结构的凝结剂。

琼脂可溶于热水，但不溶于冷水，因此在制备培养基时需要煮沸琼脂。 随着温度的升高，琼脂逐渐溶解，当温度降至40时开始凝固。 在制备培养基时，应注意的是，由于不同地方生产的琼脂质量不同，相同浓度的琼脂水溶液在凝固后硬度、透明度和颜色会有所不同。 劣质琼脂不仅凝固性差，而且携带大量杂质。

2. 琼脂凝固性知识

琼脂作为培养基的凝固剂，不仅与琼脂本身的质量有关，还受灭菌温度、灭菌时间、琼脂用量和pH值的影响。

1）0.7%～0.8%的琼脂水溶液冷却后会凝固良好，常用的微生物培养基琼脂用量趋于基本稳定，条状琼脂通常为2%左右，粉状琼脂为1%5%。

2）培养基的pH值对琼脂的凝固有很大影响，是琼脂能否在正常浓度范围内凝固的关键因素30

3） 在 430 （4）当制备的固体培养基pH值低于3时在44时，其凝固会受到灭菌温度、灭菌时间、琼脂量和pH值的影响。 其中，灭菌温度和灭菌时间与琼脂凝固呈负相关，琼脂用量和pH值与琼脂凝固呈正相关。 然而，在这些因素中，琼脂量的影响不是很大，因此在这类培养基的灭菌过程中，应重点关注灭菌温度、灭菌时间和pH值。 使用较低的灭菌温度、较短的灭菌时间、适当提高培养基的pH值可以显着改善琼脂的凝固。 pH值低（40）、pH值是影响凝固等级的主要因素。

灭菌培养基的分层。