细胞分选的常用方法
细胞分选是免疫学研究、干细胞研究、细胞**、肿瘤学研究等多个研究领域不可避免的实验程序,只有当从多细胞样品中分离出具有特定性质的细胞以达到一定的纯度时,才能进行后续分析。
从广义上讲,细胞分选分为两大类常用方法:基于细胞物理性质的密度梯度离心法和基于免疫识别特性的方法。 但前者分离的细胞纯度低、特异性差、表面标记不明确,严格来说应算作细胞分离。 基于免疫识别特征的方法包括荧光激活细胞分选(FACS)和磁激活细胞分离(MACS)。
流动和磁选的基本原理
FACS的诞生得益于流式细胞术的兴起,流式细胞术的基本原理是,当含有单个细胞的液滴通过激光束时,各种荧光素、荧光染料及其物理和生物学性质使细胞的散射光信号不同,并根据信号差异赋予液滴电荷, 使路径在通过高压静电场时发生偏转,落入不同的集电极,从而完成对目标电池的分选。
流式细胞术分选原理示意图。
MACS的基本原理是,通过将具有特异性抗体的免疫磁珠与具有相应抗原的细胞结合,一些细胞被赋予磁性,当样品缓慢流过磁场时,这些细胞会被困在磁铁上,而没有这种抗原的细胞则没有磁性,不会停留在磁场中, 从而实现靶细胞的分离纯化。
磁选原理示意图。
流式细胞术和磁分离PK的优缺点
FACS和MACS自问世以来就被广泛使用。 但是,在不同的实验要求下,FACS和MACS各有优势,应根据实验目的选择更合适的方法。 那么,FACS和MACS的优缺点是什么?
首先是成本差异。 流式细胞术设备价格昂贵,运维用工成本也高。 由于对操作环境的苛刻要求,需要设置单独的房间由专人操作,并且由于流式细胞仪操作复杂,需要专业操作人员; 关键部件**价格昂贵,如果损坏,维修和更换可能是一笔昂贵的费用。 磁选设备一般只有流式细胞仪的一小部分,操作环境不高,一般实验室都能进行,而且很容易上手,对操作人员的技术要求也不高。
第二个是对细胞的影响。 由于细胞在流式细胞术过程中需要经过高速流动步骤,FAC对细胞的刺激很大,因此对分选细胞的活力影响很大,不利于后续操作。 磁性分选,尤其是纳米珠,对细胞的影响可以忽略不计。
在分选效率方面,由于流式细胞术需要通过激光保证细胞单体,因此样品的细胞浓度不宜过高,否则细胞容易粘连,因此分选速度约为每秒10e4个细胞,而磁选可以达到每秒10e7个细胞。 此外,对于单个处理样品的体积,磁选远高于流动分选。
然而,在功能方面,流式细胞术优于磁选设备,因为它还具有分析功能。 在细胞分选纯度方面,流式细胞术可以实现更高的纯度,同时进行多参数分选,但磁选也可以提高靶细胞的纯度,通过多次分选实现多标记分选。 然而,当需要根据细胞内指示剂对细胞进行分选时,磁性分选是不可能的。
那么流选与磁选,你选择哪一个呢?
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