免疫系统就像身体的守护者，默默地守护着我们的健康。 组成这个护送团队的免疫细胞负责清除细菌、病毒和异物另一方面，它是“人体最好的医生”，通过消除体内的衰老细胞和突变细胞，为健康奠定基础。
图1免疫系统的成员。
NK细胞、T细胞、B细胞等都是免疫系统的成员，我们在前面的流式细胞术课中介绍过th1/th2/th17跟treg今天就给大家简单介绍一下单元格的选择及其指标NK细胞并讲解其检测指标和案例分析。
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NK细胞简介
NK细胞是淋巴细胞的成员，又称自然杀伤细胞（NK细胞），是体内重要的免疫细胞。 NK细胞是形态学上较大的颗粒状淋巴细胞，是除T细胞和B细胞之外的第三大类淋巴细胞，约占血液中所有免疫细胞（白细胞）的15%，属于先天免疫系统的核心细胞，主要分布在外周血、肝脏和脾脏中。 它它可以在不进行抗原预敏的情况下破坏靶细胞，并且它非mhc限制性，反应速度快，可以在免疫应答的早期阶段发挥作用
图2NK细胞示意图。
NK细胞是体内最重要的“战士”，负责杀死衰老、病毒感染、肿瘤等异常细胞。 此外，在面对癌细胞时，NK细胞不需要其他细胞的活化和致敏作用来直接识别和杀死癌细胞，因此它们也被称为人体对抗癌症的第一道防线。 如果NK细胞数量减少或功能下降，患肿瘤疾病的几率就会明显增加。
与同样属于同一家族的中性粒细胞、巨噬细胞等相比，其细菌和病毒的范围更广
与获得性免疫细胞T细胞相反，它是在预测“敌人”的入侵。它的反应更灵敏，并且具有更广泛的“杀戮”。它不仅限于杀伤肿瘤细胞，而且在抗病毒和抗衰老方面也取得了成就。
NK细胞的发育和分类
目前主流NK细胞开发模式认为，骨髓中 CD34 + CD45Ra+ 造血祖细胞 （HPC） 中的 NK 细胞**。在骨髓中，NK细胞通过共同淋巴祖细胞（CLPS）和NK细胞前体（NNKPs）从HPC发育而来，然后迁移到外周血（常规NK细胞）或组织驻留NK细胞（TRNK细胞）。
TRNK细胞的分化发生在不同的组织部位，包括肺、胸腺、肝脏、子宫、皮下脂肪组织和肾脏。 在这些位点，NK细胞具有不同的表型特征和功能，构成了NK细胞在不同成熟阶段的周期。 除了不同的组织类型，即使在同一个器官和同一个组织中，NK细胞也是高度异质的
图3NK细胞的发育和亚群。
NK细胞通常被定义为CD3、CD56+细胞，通常根据表面蛋白CD56和CD16的相对表达分为两类：cd56hicd16-（免疫调节、细胞因子产生）和cd56lowcd16+（细胞毒性）。 其中，CD56lowCD16+占所有NK细胞的90%，CD56hiCD16-low仅占10%左右。
NK细胞检测指标选择及案例
如何选择检测NK细胞的指示剂？根据以往的实验经验，为大家做如下总结：
human：cd3-cd56+cd16+
mouse：cd3-cd49b+/nk1.1+
人外周血NK细胞检测一例
人NK细胞在发育过程中表达特异性指示剂CD56，一些NK细胞在发育结束时也表达FC RIIIA（CD16）和CD57。 外周血或其他未纯化的NK细胞样本应进行CD3检测，以排除特殊类型的T细胞NKT（CD3+CD56+）。 人外周血NK细胞的结果如下图所示
图4流式细胞术检测人外周血NK细胞的结果。
检测NK细胞的标准是：cd3-cd16+cd56+
CD16 和 CD56 最好具有同型对照，其他指标由于聚类明显，可以省略。
建议对人外周血样本进行CD45染色通过CD45和SSC，它有利于淋巴细胞门控。CD45可作为单染色管使用，低速，可设定阈值。
C57BL 6小鼠Nk细胞检测案例
CD49b 和 NK11是小鼠NK细胞鉴定的两种标志物，实验时需根据小鼠品系选择其中一种。 例如，CD49B（DX5）用于BALB C小鼠，NK1用于C57BL6小鼠1. 分析时间圈 CD3-CD49B+ 或 CD3-NK11+。C57BL6小鼠NK细胞的结果如下图所示
图5C57BL6小鼠NK细胞测定的流式细胞术结果。
外周血样本直接增加CD45指数淋巴细胞群由 CD45 和 SSC 圈出
C57BL6小鼠NK细胞的检测标准是：cd3-nk1.1+
实验关键因素是红细胞裂解，红细胞裂解过多或不充分都会导致淋巴细胞群分割不明显。
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