【IHC实验】制备石蜡包埋的组织切片。
首先,实验的目的。
本实验的目的是学习和掌握石蜡包埋组织切片的制备工艺,用于后续的免疫组织化学染色(IHC)实验。 通过本次实验,我们将了解石蜡包埋组织切片制备对后续研究的重要性,并学习操作相关设备,为后续实验奠定基础。
二、实验原理。
石蜡包埋组织切片制备是用石蜡包埋组织,经过一系列的处理和切片后,就可以制备切片用于后续实验。 在本实验中,石蜡将用于固定和保存组织,并通过切片机将组织切成薄片,以便随后进行染色和观察。
3.实验程序。
1.组织收集:选择合适的组织块,用生理盐水冲洗,然后用滤纸吸干。
2.固定:将组织块置于甲醛缓冲液中并固定24小时。
3.水洗:用水冲洗固定纸巾块10分钟,换水3次。
4.脱水:将组织块依次置于%和100%酒精中,每个梯度1小时。
5.石蜡包埋:将脱水的组织块置于石蜡中并包埋。
6.切片:使用切片机将石蜡包埋的组织切成 5-7 微米的切片。
7.贴片:将切片贴在载玻片上并烘干。
8.脱蜡:将贴片后的载玻片放入二甲苯中10分钟,并更换二甲苯一次。
9.染色:H&E染色或其他需要的染色方法。
10.安装:用中性胶覆盖染色的载玻片。
4. 注意事项。
1.在脱水过程中,要保证每个梯度的时间准确,以免影响后续实验的结果。
2.包埋时温度不宜过高,以免破坏组织结构。
3.切片时,调整切片的厚度,以保证切片的完整性和一致性。
4.在脱蜡和染色过程中,重要的是要确保载玻片不移动,以免影响实验结果。
5.中性胶在使用前应过滤,以免影响安装效果。
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