【IHC实验】制备石蜡包埋的组织切片。
石蜡包埋组织切片制备是免疫组化（IHC）实验中必不可少的步骤，其目的是用石蜡固定和包埋组织样品，使其适合切片和免疫组织化学染色。 以下是制备石蜡包埋组织切片的详细步骤和注意事项。
1.材料收集和固定。
收集材料时，应尽可能选择具有代表性的组织样品，并迅速置于预冷的4%多聚甲醛中进行固定，以保持细胞的形态和结构。 固定时间一般为30分钟至1小时，具体取决于组织的类型和大小。
2.脱水和透明度。
脱水是制备石蜡包埋组织切片的重要步骤，其目的是从组织中去除水分，为下一步的蜡浸泡做准备。 常用的脱水剂是梯度醇，由低浓度逐渐更换为高浓度，每次更换需要停留几分钟到十分钟，以保证脱水效果。 二甲苯一般用作澄清剂，能迅速去除组织中的酒精，使组织透明。
3.蜡浸泡和嵌入。
蜡浸泡是将组织浸泡在热石蜡中，使石蜡渗透到组织中并取代组织中的清除剂。 这一步需要很好地掌握温度和时间，以防止组织过热或石蜡凝固。 包埋是将蜡浸渍的组织放入模具中，然后倒入热石蜡将其密封。 为了使切片容易脱落，包埋时应将组织平放在模具底部，并用小棍等工具压实组织。
4.切片和修补。
嵌入的组织块被切片，通常厚度为 3-5 微米。 切割部分应立即连接到载玻片上，并在室温下自然干燥。 为了使切片更好地粘附在载玻片上，可以将蛋白质甘油或其他粘合剂滴加到载玻片表面。
5. 注意事项。
1.采集固定时，应选择有代表性的组织样本并快速固定，以保持细胞的形态和结构。
2.脱水时，要掌握梯度醇的置换顺序和停留时间，保证脱水效果。
3.浸渍包埋时，应控制温度和时间，防止组织过热或石蜡凝固。
4.切片时应控制厚度和均匀性，以保证染色结果的准确性和可比性。
5.修补时，请选择合适的粘合剂，以确保该部分平整并牢固地附着在载玻片上。
6.操作时注意安全，避免接触有毒化学品和高温加热物品。
7.保持实验室的清洁和卫生，以防止交叉污染和细菌污染。
8.实验结束后，应及时清洗仪器和器具，并按实验室规定处理废物。
综上所述，石蜡包埋组织切片制备是IHC实验中的重要步骤之一，每一个细节都需要认真对待，以确保实验结果的准确性和可靠性。 通过不断的实践和探索，可以进一步提高石蜡包埋组织切片制备的技术水平，为科学研究和临床诊断提供更好的服务。