工具:mRNA标准品应用案例

小夏 科技 更新 2024-02-05

背景:

新型冠状病毒mRNA疫苗的成功研发,为mRNA技术带来了前所未有的关注。 mRNA技术作为一种通用技术,有望广泛应用于传染病疫苗、肿瘤疫苗、免疫、蛋白替代、性抗体等多个领域,引领医药研发进入新时代。

工具mRNA在核酸药物递送系统的研究、蛋白表达的疗效研究、mRNA药物的开发中起着非常重要的作用。

什么是工具mRNA?

工具mRNA(mRNA标准品)是成品的标准信使RNA(类似于分子实验中常用的质粒)。 mRNA标准品购买后无需处理,可直接应用于相应的实验。

ABS 具有一系列线性、环状工具 mRNA。 其中,线性mRNA采用化学化学合成的CAP1帽结构,使线性mRNA具有较高比例的天然帽结构,有5个修饰碱基(N1-甲基假-UTP、伪UTP、5-甲氧基-UTP、5-甲基-CTP、N6-甲基-ATP),优化了适合哺乳动物细胞的密码子、UTR、polya结构。 通过体外转录生成环状mRNA,然后分离纯化,得到成品。

工具mRNA分类:

1. 报告基因基因组学

报告基因 mRNA 通常用于细胞转染、翻译效率、药物递送、体内成像等。 其中,Ebison EGFP mRNA是最常用的示踪蛋白mRNA之一,具有较强的荧光稳定性,用于表达增强的绿色荧光蛋白(从水母中分离出来),发射波长为509nm,可通过荧光显微镜或流式细胞术检测,是观察mRNA递送和翻译的理想工具。

EGFP mRNA琼脂糖电泳条图。

图 EGFP mRNA转染24小时后HEK293细胞的表达效应。

ABS还拥有TDTOMATO mRNA、YFP mRNA、mBanana mRNA等荧光蛋白mRNA等报告基因工具,可用于对照验证实验,如需随时联系我们。

2. 基因编辑

CRISPR Cas9是一种先进的基因编辑系统,广泛应用于多种疾病。 Cas9 mRNA 在细胞内瞬时表达 Cas9 蛋白,降低免疫反应和脱靶的风险。

3. 免疫抗原

免疫抗原样mRNA是肿瘤免疫的理想研究工具**。 卵清蛋白 (OVA) 是丝状蛋白超家族的成员,是蛋清中发现的主要糖蛋白。 它是免疫学和生化研究的常用抗原,是一种成熟的气道高反应性模型过敏原,可激活细胞和体液免疫。

4. 蛋白质替代

EPO mRNA 用于表达人促红细胞生成素。 我们在体外使用 (ABS CaptM) 转录制备了 EPO mRNA,化学合成的 Cap1 结构使其具有高比例的天然 mRNA 帽结构,从而实现了高效表达。

工具mrna产品特点:

工具mrna好处:

1.CAP1帽结构,提高mRNA稳定性和翻译效率,更适合哺乳动物;

可选择多种修饰,添加修饰碱基可提高翻译效率,降低免疫原性;

3、适当的polya尾部结构,保证mRNA的稳定性和翻译效率;

4.完整性高,质量控制严格,便于研究和应用。

用户实验案例1:

用核酸转染试剂盒(ABS60259)将mCherry mRNA转染到HEK293细胞中24 h和48 h,荧光显微镜下观察到的红色荧光稳定,信号强。 (具体实验操作请参考核酸转染试剂盒(ABS60259)的实验操作步骤)。

图:转染mCherry mRNA24小时后的荧光。

图 mcherry mRNA转染48小时后的荧光。

用户实验示例

采用mRNA转染试剂(ABS60339)转染不同类型细胞中的线*** mRNA-egfp mRNA,对细胞进行24 h处理,荧光显微镜拍照,各类细胞均呈现强烈的绿色荧光。

图:将EGFP mRNA转染到不同的细胞类型中。

用户实验示例

将线性荧光素酶mRNA注射到活小鼠体内,小鼠称重150ug,每针注射20ul,共注射3次,3天后进行体内显像。

图 小鼠成像后将荧光素酶mRNA注射到体内mRA中。

faq:

工具mRNA保存条件是什么?

答:需贮存于-40°C、-80冰箱或液氮以下贮存,艾普信提供的产品皆为新鲜出品,为达到最佳使用效果,请于收到商品后2个月内使用完毕。 如果您不小心将 mRNA 在 -20 下储存了一小段时间(例如 1 天),您可以在琼脂糖凝胶电泳上运行 mRNA,以查看其在实验前是否降解。

工具先生na状态如何?

答:我们的工具mRNA是液态的,一般溶剂一般是1mm柠檬酸钠盐溶液,pH值为64。

工具 mRNA交货时间是多长时间?

答: 我们公司的工具mRNA都是新鲜生产的产品,我们将在收到订单后立即安排生产和交货。 一般交货时间为1-2周。

4. 工具mRNA的纯度是多少?

答:线性mRNA纯度可达90%; 如果环状mRNA长度为3-5K,则可以达到科学级纯度,通常为85%纯度。 环状mRNA序列越长,闭环效率越低,纯化难度越大。

5. 工具 Mrna推荐的瓶盖结构是什么?

a:cap1 ag。封顶率高达95%。

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