猴子转录激活剂-5(ATF-5)酶联免疫检测试剂盒的实验原理和操作步骤。
1.实验原理。
Monkey Activator of Transcription-5 (ATF-5) ELISA Kit 使用间接酶联免疫测定 (ELISA) 通过抗原和抗体的特异性结合反应来捕获和检测待测样品中的 ATF-5。 将ATF-5抗体包被在微孔板上,样品中的ATF-5与包被的抗体结合,加入酶标记的ATF-5抗体形成免疫复合物。 洗涤后,加入底物显色溶液,并通过酶催化反应显色。 最后,用酶标仪测定光密度值,计算待测样品中ATF-5的浓度。
2. 步骤。
1.准备试剂和材料:猴子转录激活剂-5(ATF-5)酶联免疫检测试剂盒、微孔板、洗涤液、样品稀释剂、移液器、实验室外套、手套、面罩、记录笔等。
2.样品处理:根据试剂盒说明书的要求,对待测样品进行适当稀释,并加入等量的样品稀释液。
3.分液:使用移液管将稀释的样品添加到板上的适当孔中,并按照试剂盒说明要求的给药顺序和量进行操作。
4.孵育:将微孔板密封并在37下孵育一定时间,使抗原和抗体充分结合。
5.洗涤:按试剂盒说明书要求洗牌板一定次数,以去除未结合的抗原、抗体和杂质。
6.酶标记抗体:使用移液管将酶标记抗体添加到板上的相应孔中。
7.再孵育:将板密封并在 37 下再次孵育一段时间,以使酶标记的抗体与抗原-抗体复合物结合。
8.洗涤:按照试剂盒说明的要求再次清洗板一定次数,以去除未结合的酶标记抗体和杂质。
9.添加底物显色剂:使用移液管将底物显色剂添加到板板上的适当孔中。
10.显色:将板在室温下放置一定时间,并观察到明显的颜色变化。
11.停止反应:使用移液管将终止溶液添加到板上的适当孔中,以停止显色反应。
12.光密度值的测定:使用酶标仪测定每个孔的光密度值,并记录数据。
13.数据处理和结果分析:根据试剂盒说明中提供的公式或图表,将光密度值转换为 ATF-5 的浓度。 进行数据分析得出实验结论。
需要注意的是,本实验操作规程仅供参考,具体操作应按试剂盒说明书的要求进行。 同时,在实验过程中要保持实验室的清洁卫生,遵守实验室安全规定,防止交叉污染和事故。