该试剂盒仅用于体外研究,不用于临床诊断。
该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆和相关液体样品中的人胃脂肪酶(LIPF)含量。
有效期:6个月。
储存条件:2-8
试剂盒组成。
备注:1(96吨48吨)打开包装后,请及时检查所有物品是否齐全。
2.标准品的浓度为pg ml
3.在对大量正常试样进行检测后,试样的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验时可直接取样并加载50 L试样。 当某些样品值超过最大标准浓度时,可以在实验前用样品稀释剂适当稀释样品。
测试前准备:
1.请提前 20 分钟将套件从冰箱中取出并平衡至室温。
2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能会结晶,这是正常的; 置于室温下,轻轻摇晃,待结晶完全溶解后再制备洗涤液。 20ml浓缩洗涤液可用蒸馏水或去离子水稀释,制得400ml工作浓缩洗涤液,未用完的可放回4
3.20 洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 20 份洗涤缓冲液的 1 份加 19 份蒸馏水。
实验原理:该试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。 将标本、标准品和 HRP 标记的检测抗体加入预包被人胃脂肪酶 (LIPF) 捕获抗体的包被微孔中,孵育并彻底洗涤。 颜色是用底物TMB形成的,TMB通过过氧化物酶转化为蓝色,并通过酸转化为最终的黄色。 颜色的深浅与样品中的人胃脂肪酶(LIPF)呈正相关。 用酶标仪在450nm的波长下测量吸光度(OD值)并计算样品浓度。
为实验准备自己的测试设备:
1.酶标仪 (450 nm)。
2.高精度点胶器和吸头:05-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37孵化器。
4.蒸馏水或去离子水。
样品处理和要求:
1.血清:将血清分离器中采集的全血标本在室温下放置2小时或4过夜,然后以1000g离心20分钟,上清液可在-20或-80下取或储存,但应避免反复冻融循环。
2.血浆:以EDTA或肝素为抗凝剂收集标本,在收集后30分钟内以2-8 1000 g离心标本15分钟,取上清液检测,或将上清液储存在-20或-80,但避免反复冻融循环。
3.组织匀浆:用预冷的 PBS 匀浆 (001m,ph=7.4)冲洗组织,除去残留的血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织撕碎。将切碎的组织与相应的PBS体积进行比较(一般按1:9的重量体积比,例如,1g的组织样品对应9ml的PBS,可根据实验需要适当调整比容,并应做记录。 建议将蛋白酶抑制剂添加到PBS)中,并在玻璃匀浆机上研磨均匀。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆进行超声处理,或反复冻融。 最后将匀浆以5000g离心5分钟,持续10分钟,取上清液检测。
4.细胞培养上清液:以1000g离心20分钟,取出上清液进行检测,或将上清液储存在-20或-80,但避免反复冻融循环。
5.其他生物标本:离心1000g,取上清液检测。
6.样品外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心除去。
7.样品保存:若样品在1周内采集检测,可保存在4个,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冷冻在-20(1个月内检测),或-80(6个月内检测),避免反复冻融, 并且标本的溶血会影响最终的检测结果,因此该试验不宜对溶血标本进行检测。
注:1严格按照规定的时间和温度进行孵育,以保证准确的结果。 所有试剂在使用前必须达到室温 20-25。 试剂使用后立即冷藏。
2.不正确的洗板会导致结果不准确。 在添加底物之前,确保从孔中吸出尽可能多的液体。 在孵育过程中不要让微孔变干。
3.消除板底部残留的液体和指印,否则会影响OD值。
4.底物显色溶液应为无色或颜色很浅,不应使用已变蓝的底物溶液。
5.避免试剂和标本的交叉污染,这可能导致错误的结果。
6.在储存和孵育过程中避免直接暴露在强光下。
7.在打开密封袋之前平衡至室温,以防止水滴凝结在冷板条上。
8.任何反应试剂都不应与漂白溶剂或漂白溶剂释放的强气体接触。 任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.过期产品不能使用。
10.如果存在疾病传播的风险,应管理所有样本,并应按照规定的程序处理样本和检测设备。
操作步骤: 1 室温平衡60min后,从铝箔袋中取出所需的板条,用自封袋密封剩余的板条放回原处 4.
2.设置标准孔和样品孔,每个标准孔中加入50升不同浓度的标准品。
3.在样品孔a中加入50L待测样品; 不添加空白孔。
4 除空白孔外,标准孔和样品孔各孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100 L,反应孔用密封膜密封,在水浴或培养箱中孵育37年60 min。
5 弃去液体,在吸水纸上拍干,用洗涤液(350 l)填充每个孔,静置 1 分钟,甩掉洗涤液,在吸水纸上拍干,重复洗盘 5 次(也可以使用洗板机洗板)。
6 向每个孔中加入 50 L 底物 A 和 50 L B 溶液,并在 37 暗中孵育 15 分钟。
7 向每个孔中加入 50 L 终止溶液,并在 15 分钟内测量每个孔在 450 nm 波长处的 OD 值。
实验结果计算:
绘制标准曲线:在excel工作表中,以标准品的浓度为横坐标,以相应的OD值为纵坐标,绘制标准的线性回归曲线,根据曲线方程计算每个样品的浓度值。
性能: 1检测范围:25 pg ml 800 pg ml。
2.灵敏度:最低检测浓度小于10 pg/ml。
3.特异性:与其他可溶性结构类似物无交叉反应性。
4.重复性:板内变异系数小于10%,板间变异系数小于15%。
技术提示:
1.混合或重溶蛋白质溶液时,尽量避免起泡。
2.为避免交叉感染,在配置不同浓度的标准品、加载样品、添加不同试剂时,需要更换移液器吸头。 此外,对于不同的试剂,请使用不同的移液器。
3.在每次孵育期间正确使用密封凝胶将确保结果的准确性。
4.混合显色基质在镀层前应为无色,并应避光保存; 如果放置微孔板,它将从颜色变为不同深度的蓝色。
5.液体的定向顺序应与显色底物的顺序相同; 加入终止液后,孔内颜色由蓝色变为黄色; 如果井内有绿色,则说明井内液体未混合; 充分混合。
说明:1由于现有条件和科学技术水平,无法对所有供应商提供的所有原材料进行全面鉴定和分析,本产品可能存在一定的质量和技术风险。
2.最终的实验结果与试剂的有效性、实验人员的相关操作以及当时的实验环境密切相关,因此请务必准备足够的标本备份。
3.同一产品不同批次之间可能略有差异,如:检测限、灵敏度和显色时间等,请按照套件中的说明进行实验操作,**说明书电子版仅供参考。
4.只有使用与该试剂盒相关的所有试剂才能保证检测效果,其他厂家的产品不能混用。 只有严格遵守该试剂盒的实验说明,才能获得最佳结果。