样品制备是指在进行实验或分析之前对样品执行的一系列处理步骤。 这些步骤旨在制备样品,以确保其适合后续实验或分析的要求。 样品制备的具体步骤可能因实验类型和样品类型而异。
多重细胞因子检测中使用的样品类型多种多样,包括血清、血浆、细胞培养上清液、尿液和裂解物。 适当的样品预处理是确保多重检测准确性的第一步。 在这里,小北将介绍几种不同的常见样品预运输方法:
样品类型
血浆:用含抗凝剂的采血管(推荐EDTA抗凝管)采集血液,两次离心后取上清液,分装后冷冻保存-80。 避免反复冻融循环和用干冰运输。
血清:用无抗凝剂(可促进凝血)的采血管(可促进凝血或空管)采集血液,4并静置2小时(避免休克,防止溶血),两次离心后取上清液,等分试样-80后冷冻上清液。 避免反复冻融循环和用干冰运输。
组织裂解物:向组织中加入适量的裂解物(裂解液中需加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,20mg组织相当于200-300ul裂解物),用组织匀浆器处理组织匀浆,置于冰箱中(4、30min),两次离心后取上清液,测定组织裂解物中BCA的总蛋白浓度(推荐浓度不低于1mgml)。 分装-80后冷冻保存,用干冰运输。
细胞裂解物:收集细胞样品后,用PBS洗涤,加入适量裂解液(裂解液中需加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,107个细胞对应200UL裂解液),置于冰箱中(4、30min),取上清液离心两次后,测定BCA总蛋白浓度(推荐浓度不低于1mgml), 等分试样-80后冷冻,用干冰运输。
细胞培养上清液:两次离心后,取上清液,分装,-80冷冻,用干冰运输。
注意:由于物种间TGF-的高度保守性和动物血清中TGF-的大量,因此在测试细胞培养上清液样品时应使用无血清培养基。 如果已经将动物血清添加到培养基中,则可以添加基线对照以获得样品中TGF-的准确值。
体液(肺泡灌洗液、尿液、滑液、脑脊液、痰液、唾液等)洗鼻等)。:两次离心后,取上清液,分装,-80冷冻,用干冰运输。
其他样本(鼻腔分泌物、眼泪、子宫液、**分泌物等)。取好样品后,将棉签放入“除底”的小试管中,放入大试管中,立即用等量的生理盐水或样品稀释剂(如100ul)冲洗棉签,离心后取上清液(最终样品量不得少于60ul), 等分-80 ul后冷冻,用干冰运输。
适用平台
液相微阵列(Luminex)。
Luminex技术以荧光编码微球为核心,融合了流式细胞术原理、激光分析、高速数字信号处理等技术,多指标并行分析,一管可同时准确定量检测多达2-100种不同的生物分子; 具有高通量、高灵敏度、并行检测等特点; 可用于免疫测定、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等多个方面和领域的研究。
电化学发光(MSD)。
电化学发光是在电极表面通过电化学引发的一种特定的化学发光反应,是电化学和化学发光过程的完美结合。 MSD 电化学发光检测使用磺基标签标记物,该标记物在多阵列和多运动微孔板的电极表面通电,然后电化学激发磺基标签标记物以发射强光。
流式细胞术液相(CBA)。
Cytometric Bead Array(CBA)是一种基于流式细胞术系统的多重蛋白质定量方法,可同时检测单个样品中的多个指标。 流式细胞术CBA技术可检测稀有样品和小样品的细胞因子、抗体、抗原等指标。 流式细胞术因其检测速度快、检测方法灵活、多指标、多参数、灵敏度高等特点,已成为基础科学研究和临床检测中不可缺少的技术手段。