牛血清白蛋白 (BSA) 是牛血清中的一种球蛋白,含有 607 个氨基酸残基,分子量为 66446kDa,等电点为47。
牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有着广泛的应用,例如在WB实验中加入BSA,通过增加溶液中蛋白质的浓度来保护酶。 防止酶的分解和非特异性吸附,可以减少某些酶的变性,减少由加热、表面张力和化学因素等不利环境因素引起的变性。
蛋白质浓度的测定 将 BCA 工作溶液配置为 50:1。 10ulc溶液(蛋白质标准品)+ 90ulPBS溶液稀释至05 mg ml 蛋白质标准品。 然后将蛋白质标准品分别加入96孔板的第1和第8标准孔中,并将待测样品的10ul加入其他样品孔中。 分别将PBS加入20ul。 向每个孔中加入200ulBCA工作溶液,并在室温下放置2小时。 用酶标仪测定蛋白质浓度:测量 A562 并根据开始计划我的 2024 年标准曲线计算蛋白质浓度。
1. 蛋白质
它是牛血清的主要成分。 除携带金属离子、脂肪酸和激素蛋白外,主要还有白蛋白和球蛋白。 纤维蛋白红素细胞促进细胞附着;A2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含有胎儿球蛋白,促进细胞附着;转铁蛋白结合铁离子,降低其毒性和细胞利用率。
2.肽血小板生长因子可以促进细胞**,是肽家族的主要成员,是主要的细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中的含量很少,但对细胞生长也有一定的作用。
3.荷尔蒙 荷尔蒙对细胞的影响是多方面的。
胰岛素:促进细胞对葡萄糖和氨基酸的摄取,并与细胞促进**有关。
胰岛素样生长因子:它与细胞表达的胰岛素受体结合,使其具有与胰岛素相同的作用。
生长激素:促细胞增殖作用。
4.其他成份
氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养素的合成培养基意义不大。 蛋白质结合状态的微量元素对细胞培养感兴趣。
BSA通常用作限制性或修饰酶的保存和反应溶液中的稳定剂,因为某些酶在低浓度下不稳定或活性低。 加入BSA后,可能起到“保护”或“载体”作用,许多酶加入BSA后可以大大提高其活性。 不需要将 BSA 添加到 BSA 中的酶通常不受影响。 对于大多数底物DNA,BSA允许更完全的消化和可重复的切割。 在 37 时,当酶切反应超过 1 小时时,BSA 可以使酶更加稳定,因为许多限制性内切酶只能在 37 小时以下存活在不含 BSA 的反应缓冲液中10"20分钟甚至更短。 另一方面,BSA 可以结合缓冲液或底物 DNA 中的金属离子和其他化学物质,从而抑制限制性内切酶活性。