牛血清是细胞培养中最常用的天然培养基,与合成基础培养基并用,一般在10-20%添加使用,其主要作用是提供细胞生长所需的营养物质、激素和生长因子。
开始规划我的 2024 养过细胞的朋友应该知道:血清由于其复杂的内部成分和不可控的外部因素,不仅是细胞生长的必需营养素,也是细胞死亡的“致命毒药”。
当我们忘记睡觉和吃饭,努力工作,同时竭尽全力养细胞时,很有可能因为一时的疏忽和粗心而选择了劣质精华液,导致珍贵的细胞意外地流出体外,一切都归零,我们不得不重新开始!
血清的质量差异很大,市场上的血清产品种类繁多,如果不小心,可能会使用质量差的血清。
血清按采血时间可分为胎牛血清、新生牛血清和犊牛血清,三者的优劣依次为:胎牛血清、新生牛血清、犊牛血清。
一般情况下,建议使用胎牛血清进行细胞培养,部分细胞可以用新生牛血清培养,不建议使用小牛血清进行细胞培养。
生产中的血清质量受采血、条件和生产工艺的影响很大,即使同一厂家的不同批次血清会有所不同;此外,不同类型的细胞对血清的适应程度不同,这可能与血清中所含的生长因子有关,因此血清在使用前应提前验证,以促进培养细胞的生长。
血清的正确储存和使用指南
保存:胎牛血清一般冷冻在-20以下,使用前应在2 8冰箱中溶解过夜,不建议在室温或37水浴下直接溶解(加热过快会导致血清中大量蛋白质沉淀,影响血清质量);如果一次使用量不大,可将其溶解并分成小包装进行冷冻保存,以避免反复冻融。 解冻后,血清保存2-8个月,一般不超过一个月。
灭活:一般血清不需要灭活。 灭活的作用是消除血清中的各种补体成分,但已经证明血清灭活后会产生大量的沉淀,会对血清的营养成分造成很大的损害,不利于细胞的生长。
沉淀:血清中的沉淀物一般为沉淀的纤维蛋白,新生牛血清中各种蛋白质含量明显偏高,溶解时易产生大量沉淀。 血清**沉淀一般不影响血清质量,当温度升至37°C时溶解(不推荐加热血清)。如沉淀量较大,可用400g离心3min,可用上清液。 血清和血清强化培养基在使用时不需要过滤。
使用精华液的一些问题
1.如何更换精华液?
在需要更换不同品牌或批次的血清之前,您需要提前验证您要使用的血清,并且您可以使用自己定期培养的细胞,以确保血清促进细胞生长。 改变用途时,可以将要更换的血清与原来的血清1:1混合2代,待细胞完全适应后再更换。
2.血清颜色有问题。
血清颜色以黄色或红色为主,呈淡黄色或微红色为正常现象。 这主要是受血红蛋白含量的影响,如果颜色太深(接近介质的颜色),可能是采血过程中溶血引起的**。
3.血清沉淀问题。
血清中的沉淀主要是由纤维蛋白凝集产生的,一般来说,每次冻融都会产生一部分沉淀,但不影响血清的质量和使用。 此外,血清加入培养基后也有可能析出,特别是灭活后,血清会继续产生黑色颗粒,可能会被误判为污染。 通常,血清产生的沉淀物在显微镜下以微小的不规则絮状物或颗粒物观察,检查其是否被污染的最佳方法是使用琼脂平板进行检测。