蛋白质印迹 (western blot)是一种通过电泳分离组织或细胞的总蛋白,然后将其转移到NC膜或PVDF膜上,然后利用特异性抗体检测特异性抗原的蛋白质检测技术,已广泛应用于蛋白质表达检测、抗体活性检测和疾病的早期诊断。
样品制备要求:
组织样本:组织大小为1cm 1cm,取冰,用生理盐水洗去血渍和污垢,取出非研究所需的组织,放入贴有标签的冻存管中,经液氮速冻后,转移到-80冰箱中保存,在干冰上运输。
细胞样本:将培养的细胞与细胞一起刮或胰蛋白酶化,离心收集细胞团,要求细胞团为1 107如米粒或大豆大小,液氮速冻后放入-80冰箱中保存,干冰运输。
全血样本:肝素钠(绿头)或EDTA(紫头)抗凝管收集全血1ml,倒置数次使血液与抗凝剂充分混合,1小时内提取白细胞,细胞质量要求1 107如米粒大小或大豆、液氮速冻后放入-80冰箱保存, 干冰运输。
蛋白质提取物:总蛋白质浓度(细胞不低于 3 g l,组织不低于 5 g l)。
注意:建议提取的蛋白质按浓度测定,然后变性,先加入样品缓冲液,然后取95水浴10min,缓慢恢复到室温后再离心。 变性蛋白质可直接在超低温下储存(-80°C冷冻储存或干冰运输)。
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