中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
sn/t 5442-2022
测定出口植物源性食品中的丙硫菌唑及其代谢物残留
液相色谱法质谱分析质谱分析
determination of prothioconazole and its metabolite residues
in foodstuffs of plant origin for export-lc-ms/ms method
前言
本文件符合GB T 11-2020《标准化工作指南第1部分：标准化文件的结构和起草规则》。
gb/t 20001.4-2015《标准编制规则 第4部分：试验方法标准》和SN T 0001-2016《出口食品和化妆品理化测定方法标准编制基本规定》。
请注意，该文件的某些内容可能涉及专利。 本文档的发布者不承担识别这些专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提交并集中提交。
本文件由：中华人民共和国合肥海关技术中心、中华人民共和国银川海关技术中心、中华人民共和国杭州海关技术中心、中国民航大学起草。
本文件主要起草人：宋伟、韩芳、王芳环、陈达、娄承杰、卢亚宁、刘玉新、周殿兵、丁磊、徐曼曼、王宇、贾雪英、侯建波、郑平。
范围
本文件规定了用于检测出口植物源性食品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙康唑残留的液相色谱-质谱法。
本文件适用于小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、红豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽、甜菜、生菜、西红柿、黄瓜、马铃薯、梨、葡萄、草莓等植物源性食品中丙硫菌唑及其代谢产物脱硫菌唑残留量的定性鉴定和定量测定。
规范性参考文献
以下文件的内容通过正文中的规范性引用构成本文件的基本规定。 其中，注明有日期的参考文件，只有与该日期对应的版本适用于本文件;对于未注明日期的参考，文档的最新版本（包括所有变更通知单）适用于本文档。
GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量。
GB T6682 分析实验室用水规格及试验方法。
术语和定义
本文档中没有需要定义的术语和定义。
方法原则
丙硫菌唑及其代谢产物脱硫环唑在样品中的残留量为01%甲酸乙腈溶液萃取、基质分散固相萃取纯化、液相色谱质谱、质谱测定、外标法定量。
试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯水，水为GB T 6682的1级水。
5.1乙腈：色谱纯。
5.2 醋酸：色谱纯。
5.3.甲酸：色谱纯。
5.4 醋酸铵：色谱纯。
5.5正己烷：色谱纯。
5.6.抗坏血酸。
5.7.氯化钠。
5.8无水硫酸镁：在650下灼烧4h，贮存于干燥器中，冷却备用。
5.9 1%甲酸乙腈溶液：取10毫升甲酸（5.）3）加入100ml容量瓶中，使用乙腈（51）将音量调到音阶，搅拌均匀，待用。
5. 10 1.5%抗坏血酸溶液：取抗坏血酸15g（56）、用水稀释，设定为1 000毫升。
5.11 20%乙腈溶液：取乙腈20ml（5.）1） 用水稀释并设置为 100 毫升。
5.12 丙硫菌唑：C14H15Cl2N3OS，CAS号：178928-70-6;丙硫菌唑-脱硫剂：C14H15Cl2N3O，Casno 120983-64-4。纯度大于或等于98%。
5.13.标准贮备液的配制：精密称取丙硫菌唑和脱硫丙康唑标准品适量（精确至0.）。1mg），分别用乙腈溶解，配制至浓度为10 mg ml 标准储备液，0 4 避光储存，可使用 6 个月。
5.14 中间混合标准溶液：移液器 100毫升丙硫菌唑标准储备溶液和100毫升去硫丙硫菌唑标准储备溶液（5.）13）、转移至100ml棕色容量瓶中，用乙腈设定体积，溶液浓度为10g ml。 0 4 冷藏避光保存，可使用3个月。
5.15.标准工作液：根据需要，抽取标准中间液适量（514）、配制成125μg/l、2.混合 5 g l、5 g l、25 g l、50 g l 的标准溶液，使用前准备。
十八烷基键合硅胶（c18m
n-丙基乙二胺（psam~60m
5.18 膜：022 m，有机教师。
仪器设备
6.1 液相色谱-质谱谐波质谱仪：配电喷雾离子源 （ESI）。
6.2、分析天平：电感为001 g 和 0000 1 g。
6.3台粉碎机。
6.4.纸巾捣碎机。
6.6.样品筛：孔径为2mm。
6.6.均质机：15000转分
6.7.涡旋振动筛。
6.8 高速冷冻离心机：转速不低于10 000 rmin。
分析步骤
7.1.样品制备和保存。
7.1.1 小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、红豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽。
取出代表性样品500g，用粉碎机全部粉碎，充分混合，均匀分成2份作为样品，装入干净的容器中，密封标记，避光保存在-18°C以下。
7.1.2 甜菜、生菜、西红柿、黄瓜、葡萄、草莓、梨、土豆。
取样按GB 2763的规定进行。 对于个体较小的样品，所有样品均在采样后进行处理;对于具有大个体的基本上均质的样品，可以在对称轴或对称表面上将它们分割或切割成小块对于拉长、扁平或每个部分具有不同成分含量的样品，可以在不同的部分切割或切成小块进行加工取样后，将样品切碎，充分混合，四等份取样或直接放入组织捣碎机粉碎成匀浆，均匀分成2份作为样品，装入干净的容器中，密封标记，在-18°以下的温度下保存。
7.2 提取。
7.2.1小麦、大麦、燕麦、黑麦、大豆、玉米、红豆、土豆。
称取约5g试样（精确至0.）。01g），置于带塞子的50ml棕色离心管中，并迅速加入10ml抗坏血酸溶液（510）、涡旋1min使试样完全润湿，然后加入10ml1%甲酸乙腈溶液（59）涡旋振荡后超声提取10分钟向离心管中加入 5 g 氯化钠 （5.）7）涡旋振荡1分钟;8 000 r min 4 离心 5 min，取 10ml待纯化的上清液。
7.2.2 甜菜、生菜、西红柿、黄瓜、葡萄、梨、草莓。
称取约5g试样（精确至0.）。01g），置于带塞子的50ml棕色离心管中，并迅速加入10ml抗坏血酸溶液（510） 涡旋 1 分钟加入 10 ml 1% 乙腈甲酸盐溶液 （5.）9）涡旋并摇动2分钟，然后加入5g氯化钠（57）涡旋振荡1分钟;8 000 r min 4 离心 5 min，取 10ml待纯化的上清液。
7.2.3 油菜籽、花生仁、葵花籽。
称取约5g试样（精确至0.）。01g），置于带塞子的50ml棕色离心管中，并迅速加入10ml抗坏血酸溶液（510）、涡旋1min使试样完全润湿，然后加入10ml1%甲酸乙腈溶液（59）涡旋振荡后超声提取10分钟向离心管中加入 5 g 氯化钠 （5.）7）涡旋振荡1分钟;在8000r min4°C离心5分钟，取2取上清液0ml，再加乙腈饱和正己烷溶液除去油数次，取10ml待纯化下层易颜溶液。
7.3.净化。
7.3.1小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、红豆、大豆、甜菜、生菜、西红柿、黄瓜、葡萄、草莓、土豆、梨。
遗嘱 1将0ml上清液放入容器中50 mg c1850 mg psa和150 mg无水硫酸镁（离心管2ml，涡旋30秒，10,000rmin，4离心5分钟;取 05ml上清液，加05毫升20%乙腈溶液（5.）11） 通过有机滤膜稀释至棕色样品瓶中，用于 HPLC-MS MS 检测。
7.3.2 油菜籽、花生仁、葵花籽。
遗嘱 1将0ml上清液置于充满150mg C mg PSA（517）和150mg无水硫酸镁（58）在2ml离心管中;涡旋30秒，10 000 r min 4 并离心 5 分钟取 05ml上清液，加05毫升20%乙腈溶液（5.）11）稀释后，通过有机滤膜（如有浑浊，可按10 000 r min4离心5 min，再取上清液通过有机滤膜）至棕色样品瓶中进行HPLC-MS MS检测。
7.4 测定。
7.4.1 液相色谱参考条件。
7.4.1.1 根液相色谱柱：C18 色谱柱，50 mm20 mm （内径）， 18 m，或同等水平。
7.4.1.2 流动相：A为纯水，B为乙腈。
7.4.1.3.柱温：35°C。
7.4. 1.4 注射量：100μl。
7.4.1.5 流量：04 ml/min。
7.4.1.6 流动相和梯度洗脱条件：见表1。
7.4.2 质谱参考条件。
7.4.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。
7.4.2.2、扫描方式：正负切换方式。
7.4.2.3、检测方式：多反应监测模式（MRM）。
7.4.2.4、雾化气体、干气、鞘气、碰撞气均为高纯氮气等适宜气体使用前应调整各气体的流速，使质谱灵敏度满足检测要求。 喷雾电压、碎裂电压和碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度，参考质谱参数见附录A。
7.4.3.定性测定。
如果检测到的质谱峰的保留时间与标准保留时间相差不超过2，则根据液相色谱-质谱质谱联用条件测定样品和标准工作溶液5%，定性离子对的相对丰度（表示为强度相对于最强离子丰度的百分比）为相同浓度标准工作溶液的相对丰度，相对丰度的允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中相应的分析物。
7.4.4.定量测定。
在相同的实验条件下，一系列标准工作溶液（515）从低浓度到高浓度进行进样检测，并绘制定量子离子峰面积，得到标准曲线。待测试样中丙硫菌唑及其代谢产物的响应值应在标准曲线的线性范围内，如果超过线性范围，应稀释至相应范围后再进样分析。 采用外标法进行定量。 上述色谱条件下丙硫菌唑及其代谢产物脱硫丙康唑的多反应监测（MRM）色谱图见附录B，峰时间分别为2.，9分钟 和 32min。
7.4.5.空白测试。
除不添加样品外，均按上述测定步骤进行。
7.4.6 结果的计算和呈现。
用色谱数据处理软件或按公式（1）计算样品中分析物的量，从计算结果中扣除空白值。
式中：x——样品中分析物残留量，单位为毫克/千克（mg kg）;
c——标准工作曲线上被测组分溶液的浓度，单位为微克/毫升（g ml）;
v——供试品溶液的最终体积，单位为毫升（ml）;
m - 样品溶液的当量质量，单位为克（g）。
定量限和**速率
8.1 定量限 （LOQ）。
该方法中丙硫菌唑和去硫菌唑的定量限为0005mg/kg。
8.2 ** 速率。
小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、红豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽、甜菜、生菜、西红柿、黄瓜、马铃薯、梨、葡萄、草莓中不同添加量的丙硫菌唑及其代谢产物的平均**率数据见附录C。
*从：