**:D iancheng Biotechnology Diancheng Case |使用自动细胞计数仪进行酵母细胞计数
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酵母可用于多种应用，包括基础研究、酿造和蒸馏以及食品生产，所有这些都需要准确的细胞计数和活力测定。 事实证明，较小的尺寸和形态对于自动细胞计数仪来说是相当具有挑战性的，并且利用活染色剂手动计数酵母的方法既麻烦又容易出错。 在这篇文章中，我们将分享如何使用 LUNA FX7 全自动细胞计数仪准确可靠地对酵母细胞进行计数。
1 将酵母菌株 EC1118 接种到 YPD 肉汤中，并在 RPM 下培养过夜。
2. 以 1：3 至 1：5 的比例将酵母稀释在 1xPBS 中。
3将稀释的培养物稀释成2个相等的样品，然后将一个样品热灭活（65,20分钟）以产生“活细胞和死细胞”用于活力测试。
4 使用酵母细胞缓冲液以细胞：缓冲液 = 1：5 和 1：10 的比例进一步稀释细胞。
5 活力试验：如表所示混合活细胞和死细胞。
1 通过 LUNA-FX7 全自动细胞计数仪测量的细胞活力线性。
为了确定细胞活力的线性，使用活细胞和死细胞制备各种活力的样品，然后使用 Luna-FX7 自动细胞计数仪进行计数。 使用LUNA-FX7，可以在荧光模式下检查活力，或在明场模式下检查[细胞计数和活力]。
为了确定明场模式下的细胞活力，将酵母样品与相同体积的0混合混合 02% 亚甲蓝染色剂，并将 10 L 样品加载到 LUNA 细胞计数载玻片上。 将酵母样品制备为死细胞，%活细胞（100%）。
使用 LUNA-FX7 自动细胞计数仪。
明场模式下的细胞计数和活力用于确定细胞活力。
酵母细胞染色并用亚甲蓝标记。
如图所示，将 5 个样品替换为 002%亚甲蓝染色并在明场模式下成像[细胞计数和活力]。 计数 3 次以计算平均活力并相应地确认细胞活力的线性。 活力 R2 = 09964，这与理论生命力高度契合。
使用 LUNA-FX7 自动细胞计数仪。
明场模式下的细胞计数和活力用于确定细胞活力。
线性图确认测量的存活率与理论上预期的存活率 （r2=0.） 相符。9964)
紧接着，为了在荧光模式下研究细胞活力，用 AOPI 染色剂对 5 个酵母样品进行染色，并将 10 L 个样品加载到 PhotoSlide 载玻片中。 AOPI染色后，拍摄并观察图像。
如下图所示，对5个不同活力的样品进行3次计数，测得酵母细胞活力为R2=09979，与理论活力有显著相关性。
使用 LUNA-FX7 自动细胞计数仪。
细胞活力由荧光模式下的[细胞系和原代细胞，高级]测定。
酵母细胞染色并用吖啶橙碘化丙啶标记。
使用 LUNA-FX7 自动细胞计数仪。
细胞活力由荧光模式下的[细胞系和原代细胞，高级]测定。
线性图确认了测量的活力和理论上预期的活力 （r2=0）。9979)
2 LUNA-FX7 全自动细胞计数仪上细胞浓度分析的线性。
为了确定使用LUNA-FX7自动细胞计数仪计数酵母时不同浓度的线性，制备了高浓度的酵母，并通过连续稀释液测量浓度。
对于明场模式下的观察，请使用 002%亚甲蓝染色，并在明场模式下分别在[总细胞计数]和[细胞计数和活力]中计数。
从图中可以看出，测得的 R2 值为 0998 和 09991。在荧光模式下也观察到这一点，其中 R2 值为 09753。这意味着使用 LUNA-FX7 的酵母计数在从高浓度到低浓度下都显示出高线性，并且使用 LUNA-FX7 可以进行更准确的测定。
通过这些实验，我们可以思考酵母细胞定量的局限性。 酵母细胞的平均细胞大小为 3 4 m，典型的哺乳动物细胞大小为 10 m。 因此，在哺乳动物细胞中使用 2 通道载玻片500e+4 到 1与 50 e+7 细胞 ml 的范围相比，酵母细胞最多可调整 500e+5 到 300e+7 cells/ml。
在LUNA-FX7全自动细胞计数仪上以明场模式测量酵母样品的浓度。
总细胞计数。
细胞计数和活力。
在LUNA-FX7自动细胞计数仪上以荧光模式测量[细胞系和原代细胞，高级]中酵母样品的浓度。
3 LUNA-FX7 自动细胞计数仪与血细胞计数器的比较。
我们进行了一项实验，将传统使用的血细胞计数器与 LUNA-FX7 进行比较。
与之前的实验一样，样品的采样率为 0用 02% 亚甲蓝和 AOPI 染色，并将 10 L 分别加载到血细胞计数器、Luna 和 Photonslide 载玻片上。 在 LUNA-FX7 的明场和荧光模式下拍摄图像，并将浓度与血细胞计数器上测量的浓度进行比较。 如图所示，血细胞计数器测量的值与 LUNA-FX7 测量的值之间没有观察到显着差异。
血细胞计数器和 Luna-FX 自动细胞计数仪的酵母计数结果比较。
结论。 在这个实验中，我们证明了LUNA-FX7可以准确可靠地计数酵母细胞。 此外，与传统的手动计数方法相比，使用 LUNA-FX7 进行酵母计数的速度更快、更可靠且更不容易出错。