1. 什么是细胞传代?
细胞传代是细胞培养过程中的一项基础技术,是指在一定条件下对培养的细胞进行分离和再培养的过程。 在传代过程中,细胞逐渐生长并充满整个培养容器,因此需要分离和重新培养。 细胞传代是实验室细胞培养的基本操作之一,也是细胞生物学实验中必不可少的步骤之一。
第二,细胞传代的基本步骤。
1.细胞分离:将原代细胞或传代细胞从培养容器壁上分离。 常用的分离方法有机械分离和酶解。 机械解离是一种通过轻轻敲击或刮擦细胞以将其从培养容器壁上分离的方法。 酶水解是添加特定的酶,使细胞之间的连接脆弱且易于分离。
2.细胞洗涤:洗涤分离的细胞以去除培养基中残留的酶和杂质。
3.细胞计数:对洗涤的细胞进行计数以确定传代所需的细胞数。
4.细胞分散:将洗涤后的细胞分散,使细胞均匀分布在培养基中。 常用的分散方法有机械分散法和酶解法。
5.细胞接种:将分散的细胞接种到新的培养容器中,并加入适量的培养基。
6.培养:将接种的培养容器放入恒温培养箱中,进行细胞培养。
3.传代细胞的类型。
根据细胞的特性和特性,传代细胞可分为原代细胞和连续细胞系两大类。 原代细胞是从体内取出后直接培养的细胞,一般只能培养有限的世代(10-20代),之后会衰老和死亡。 连续细胞系由原代细胞突变而来,具有无限增殖的能力,如肿瘤细胞、杂交瘤细胞等。 常见的连续细胞系有HeLa细胞系、A549细胞系、BeAS-2B细胞系等。
4.注意事项。
1.术前准备:术前需要准备好所需物品,如培养皿、吸管、离心管、显微镜等,并消毒。 同时,操作人员需要洗手并穿戴防护服、口罩等个人防护装备。
2.操作过程:操作过程中要注意无菌操作,以免污染。 同时,要掌握细胞分离、洗涤、计数、分散、接种等技术要点,保证细胞的活力和纯度。
3.培养条件:细胞传代需要在恒温、恒湿、无菌的环境中进行,以保证细胞的正常生长和繁殖。 同时,需要定期检查细胞的生长状态和形态特征,以及培养基的pH值和营养成分是否正常。
4.废物处理:废介质和细胞在丢弃之前需要消毒,以避免对环境和人类造成危害。
总之,细胞传代是实验室中一项重要的技术操作,需要掌握相关的基础知识和技术要点,才能保证细胞的正常生长繁殖。 同时,要严格遵守操作规程和注意事项,避免污染和安全事故的发生。