哈尔滨兽医研究所率先开发出针对 L1 分支 NADC30 的候选疫苗株,如 PRRSV

小夏 科技 更新 2024-01-29

PRRSV是一种传染病,长期威胁着中国养猪业,给中国养猪业造成了最大的损失。 规模化养猪场可以通过综合防控措施与免疫接种相结合来防控疫情,而中小型猪场只能更多地依靠免疫接种。 PRRSV免疫的最大挑战是疾病变异频繁,不同菌株之间的交叉保护并不理想。

表1:目前在中国流行的主要PRRSV毒株。

根据ORF5区域的系统发育关系,基于系统发育谱系的PRRSV分型方法:

PRRSV-1毒株分为4个亚型,I亚型(全球)、I亚型(俄罗斯)、II亚型和III亚型)。

PRRSV-2 菌株分为 9 个分支 (L1-L9)。

PRRSV-2目前广泛流行,具有高度的遗传多样性,9个分支可进一步划分为若干亚分支。

其中,PRRSV-2的L1分支在美国和亚洲的养猪业中最为普遍和多样化,具有全球趋势。

美国:2021 年,L1 分支(NaDC30-Like 和 NaDC34-Like)仍然是最普遍和最多样化的谱系。

韩国和日本:L1 分支 (18个亚系;NADC30-like)是第二大PRRSV组。

中国:L1分支已成为中国的主要流行菌株(64%)。

L1分支NADC30样菌株的致病性差异较大,我国部分NADC30样菌株表现出较高致病性。

目前,疫苗被广泛用于PRRSV的预防和控制。

在中国,目前有两种类型的PRRS疫苗:减毒活疫苗和灭活病毒疫苗。

目前,中国有9种商业疫苗用于控制和预防PRRSV感染,包括L8包覆活疫苗(CH-1R、JXA1-P80、HUN4-F112、TJM-F92、GDR180和PC)和L5包覆活疫苗(Respprrs MLV Ingelvac PRRS)。MLV)和L8分支灭活疫苗(CH-1A株),这些疫苗的应用在我国PRRS的防控中发挥了重要作用,但在国际上尚无针对性NADC30 PRRSV 样 L1 分支 PRRSV有效的疫苗。

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪病综合防控创新团队和猪蓝耳病伪狂犬病研究创新团队在全球率先开展了L1分支PRRSV候选疫苗sd-r并评价了该菌株对同源和异源菌株的保护作用。

研究人员测量了大量NaDC30样PRRSV全基因组序列分析表明,NSP9和GP2-3是中国NADC30样PRRSV重组的热点随后,筛选出在两个重组热点处具有小片段重组且致病性轻度的NadC30 PRRSV样SD菌株,并通过亚传代减弱,获得稳定传代对MARC-145细胞的细胞毒性(SD-R菌株,F125代)。 与亲本株相比,SD-R候选疫苗在氨基酸中共产生31个稳定突变,在非翻译区产生4个核苷酸

由于不同Nadc30样PRRSVs的全基因组同源性低,重组模式复杂,本研究选择NADC30样PRRSV HLJWK108-1711菌株(重组模式复杂,与SD菌株的全基因组核苷酸同源性为89。9%)用于评价交叉保护效果。

SD-R候选疫苗的高剂量免疫对仔猪是安全的

通过qPCR评估血清样本和10个器官组织:

高剂量组:接种后次日采集血清样本。

重复剂量组:接种后和 28 天时收集血清样本。

仅在接种疫苗后 7 或 14 天的血清样本中检测到低水平的病毒拷贝。 此外,在肺、扁桃体、淋巴结和少量组织中检测到低水平的病毒拷贝(图 1)。

图1 高剂量组(a)和(b)以及重复剂量(c)组10个组织或血清中的病毒载量与攻击后的对照组相比,疫苗株免疫不会引起病毒血症,并显着降低血液和组织中的病毒载量

接种SD-R候选疫苗后,免疫猪未检测到病毒血症,与攻击对照组相比,免疫组血液中的病毒载量显著降低,组织中的病毒载量显著降低(图2)。

图2 NADC30 PRRSV SD株和HLJWK108-1711株攻击后各组病毒血症和组织病毒载量的变化与对照组相比,SD-R免疫接种后应药可显著改善体温升高及临床表现

免疫挑战组的体温仅短暂升高,明显低于对照挑战组。 未免疫接种的受感染组经历了长时间的体温升高(图3)。

SD菌株和HLJWK108-1711菌株在攻击组均表现出不同程度的食欲不振(每日体重减轻),而免疫攻击组的每日体重增加没有变化(图3)。

图3 NADC30 PRRSV SD菌株和HLJWK108-1711菌株攻击后体温和体重的变化SD-R 免疫后 7-14 天产生 N 蛋白抗体(平均 SP 小于 2.)0),攻击后7-10天,仔猪抗体水平升高

图4 NADC样30 PRRSV SD株和HLJWK108-1711株攻击后的PRRSV抗体水平病理分析显示,对照组激发后肺部表现为典型的斑片状实变和淋巴结出血,免疫激发组无明显病理改变(图5)。

图5 NADC30 PRRSV SD菌株和HLJWK108-1711菌株攻击后的病理学和组织病理学变化。

与CH-1A或HP-PRRSV不同,NADC30样PRRSV具有较低的全基因组相似性,并且原始疫苗不如预防该毒株有效。

几乎所有 NADC30 样 PRRSV 都是重组病毒。 虽然重组位置相对随机,但统计分析表明重组热点的核苷酸位置约为 7900 至 8100 (NSP9) 和 12400 至 13500 (GP2-GP3)。。研究人员选择了具有上述两个重组区域(NSP9 区域的 7365-7661 和 GP2-GP3 区域的 12305-12773)的 NADC30 样 PRRSV SD 在 MARC-145 细胞中传代候选疫苗株具有以下特点

稳定性好;它对不同的NADC30 PRRSV样菌株具有保护作用;

基于SD-R的高剂量和重复剂量试验对所有仔猪都是安全的,包括无发热、无临床体征,只有少数免疫仔猪在肺、扁桃体和淋巴结中检测到低水平的病毒血症;

良好的保护。

该候选疫苗有可能开发出一种用于预防和控制NADC30样PRRSV的商业疫苗。

公司开发了猪疫、禽病、反刍动物、水产动物荧光PCR试剂和抗体检测试剂,配套荧光定量PCR仪、核酸自动提取仪、酶标仪等设备,可准确诊断动物传染病,指导疾病防控。

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