仅供研究使用。
牛 X-box 结合蛋白 1 （XBP1） ELISA 试剂盒。
实验原理：
该试剂盒采用双抗体一步法夹心酶联免疫吸附测定 （ELISA）。 将标本、标准品和 HRP 标记的检测抗体加入预包被的牛 X-box 结合蛋白 1 （XBP1） 捕获抗体的包被微孔中，孵育并彻底洗涤。 与底物TMB显色，TMB被过氧化物酶催化为蓝色，并通过酸转化为最终黄色。 颜色深浅与样品中牛X-box结合蛋白1（XBP1）呈正相关。 用酶标仪测量波长为450nm的吸光度（OD值）并计算样品浓度。
套件组成：
注意：使用前，请检查试剂盒中试剂的标签和数量是否与**一致。
牛 X-box 结合蛋白 1 （XBP1） ELISA 试剂盒。
如何操作套件：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释后，应充分混合，混合时尽量避免起泡。 每个测试都应做一个标准曲线。 如果样品浓度过高，用样品稀释剂稀释，使样品符合试剂盒的检测范围。
1.进样：空白孔、标准孔、待测样品孔分开设置。 空白孔中加入100升样品稀释液，剩余孔中加入100升标准品或待测样品，注意无气泡，将样品加入微孔板孔板孔底部进行样品添加，尽量不要接触孔壁，轻轻摇晃混合， 在微孔板上添加盖子或盖子，37反应120分钟。为确保实验结果的有效性，请为每个实验使用新的标准溶液。
2.丢弃液体，甩干，不要清洗。 每孔加入100升生物素化抗体工作液（取1升生物素化抗体与99升生物素化抗体稀释液的比例，轻轻混合，使用前1小时内配制），37,60分钟。
3.孵育 60 分钟后，弃去孔中的液体，甩干，洗涤板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，每孔 350 升，甩干。
4.加入辣根过氧化物酶标记的亲和素工作溶液（与生物素标记的抗体工作溶液相同）100 l，每孔 37、60 分钟。
5.孵育60分钟后，弃去孔中的液体，甩干，洗涤板5次，每次浸泡1-2分钟，每孔350升，然后甩干。
6.依次向每个孔中加入90 L底物溶液，在黑暗中显影37种颜色，避光（30分钟内，标准品的前3-4个孔肉眼可见明显梯度蓝色，最后3-4个孔中的梯度不明显，可终止）。
7.每孔加入 50 l 终止溶液以终止反应（此时蓝色变为黄色）。 终止液的加入顺序应尽可能与底物溶液的顺序相同。 为保证实验结果的准确性，应在底物反应时间结束后尽快加入终止液。
8.用酶联仪器在450nm处依次测量每个孔的光密度（OD值）。 测试在加入终止液后 15 分钟内进行。
牛 X-box 结合蛋白 1 （XBP1） ELISA 试剂盒。
标本的采集和保存：
血清：全血标本应在室温下以1000×g离心20分钟2小时或4过夜，取上清液检测，或标本保存在-20或-80，但应避免反复冻融。
血浆EDTA或肝素可用作抗凝剂，在标本采集后30分钟内在2-8°C下以1000×g离心15分钟，或标本可在-20或-80°C下储存，但应避免反复冻融循环。
细胞培养上清液或其他生物标本：以1,000×g离心20分钟，取出上清液进行检测，或将标本储存在-20或-80，但避免反复冻融循环。 （注：标本溶血会影响检测结果，故溶血标本不宜进行本检测。 )
试样稀释原理首先，通过文献检索了解待测样品的近似含量，并确定合适的稀释倍数。 只有当测定结果在标准曲线范围内稀释时，测定结果才是准确的。 稀释过程应详细记录。 计算浓度时，试样的浓度应乘以“n”倍稀释后的“n”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶用样品稀释至1ml后使用，盖上盖子后静置10分钟以上，然后反复倒置揉搓帮助溶解，其浓度为300pg ml，经过一系列稀释后，稀释300 pg ml、150 pg ml、75 pg ml、375 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg ml，样品直接稀释为标准浓度为0 pg ml，在使用前15分钟内制备。 制备150 pg ml标准品：05ml（不少于0。5ml）300pg ml的上述标准品加入0在装有 5 ml 样品稀释剂的 Eppendorf 管中，充分混合，依此类推。
生物素化抗体的稀释原理：使用前用生物素标记的抗体稀释液稀释，稀释前根据每次实验所需的总量（每孔100 l）进行准备，实际预比较时再准备0次1-0.2ml。例如，将10 l生物素标记的抗体与990 l生物素标记的抗体稀释，轻轻混合，并在使用前一小时内制备。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原理：使用前用辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液稀释，稀释前根据每次实验所需的总量（每孔100升）进行配制，实际配制时再配制01-0.2ml。例如，将10升辣根过氧化物酶标记的亲和素与990升辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释，轻轻混合，并在使用前一小时内配制。
牛 X-box 结合蛋白 1 （XBP1） ELISA 试剂盒。
实验结果计算：
以标准的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上画出标准曲线，根据样品的OD值从标准曲线上找到相应的浓度乘以稀释因子;或者用标准品的浓度和OD值来计算标准曲线的线性回归方程，将样品的OD值代入方程中计算样品浓度，再乘以稀释因子，得到样品的实际浓度。
绘制标准曲线：在excel工作表中，以标准品的浓度为横坐标，以相应的OD值为纵坐标，绘制标准品的线性回归曲线，根据曲线方程计算各样品的浓度值。
牛 X-box 结合蛋白 1 （XBP1） ELISA 试剂盒。
预防 措施：
1.混合蛋白质溶液时，尽量温和，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，洗涤不充分很容易造成误报。
3.一次充填时间**的时间控制在5分钟以内，如果试样数量较多，建议使用排式加样。
4.请在每次测量的同时制作标准曲线，并做双井。
5.如果试样中待测物质的含量过高，请先稀释后测量，计算时乘以稀释系数。
6.配制标准品和供试品溶液时，请配制相应稀释液，不要混用。
7.基材应避光。
8.请勿用其他制造商的试剂替换试剂盒中的试剂。
牛 X-box 结合蛋白 1 （XBP1） ELISA 试剂盒。
套件性能
1.准确度：标准品与预期浓度相关系数r值的线性回归，大于等于09900。
2 灵敏度：最低检测浓度小于10pg ml。
3 特异性：与其他可溶性结构类似物无交叉反应性。
4、重复性：批内和批内应分别小于9%和15%。