甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒
说明书。
产品名称]通用名称：甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）。
产品名称：甲型和乙型流感卡
包装] 20 份盒装。
有可能的用途]本品用于体外定性检测人鼻咽拭子标本中甲型和乙型流感病毒核蛋白抗原。
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种体外免疫层析试验，可以快速对甲型和乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。
试验简介
流感是一种高度传染性的急性病毒感染，发生在呼吸道，属于传染病类别，可以通过咳嗽或打喷嚏时排出的活病毒气溶胶在人与人之间传播。 甲型流感病毒在每年的秋冬季节比乙型流感病毒更为流行和严重，最严重的流感病毒是由它引起的，而乙型流感则相对较轻。
甲型和乙型流感的快速诊断测试对于获得有效的抗病毒药物具有重要意义**。 流感的快速诊断不仅可以减少患者住院的天数，减少抗菌药物的使用，还可以降低住院费用。
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）为从鼻咽拭子标本诊断甲型和乙型流感提供了一种简单快速的方法;使用方便，快速给出结果，急诊科测试中提供的信息可以帮助医生选择最佳选择，并决定是否入院。
甲型流感病毒有许多亚型，其中一些可以在鸟类中找到。 2024年报告了人类甲型禽流感（H5N1，流感病毒的一种亚型，主要发生在鸟类中）*，从那时起，人群中出现了H5N1病例，这引起了人们对H5N1的担忧，H5N1变异使其在人群中更具传播性，并且由于记录的禽流感患者比例较低，因此尚不清楚在这组患者中使用快速检测的程度**。
测试原理]甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂（胶体金法）采用薄膜免疫层析技术，利用高灵敏度的单克隆抗体检测鼻咽拭子标本中甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原，这些单克隆抗体与对照抗体一起固定在膜载体上，形成三条独特的线。膜载体与其他试剂垫结合形成试纸。 试纸位于一块称为测试卡的铰链纸板中。
拭子标本需要进行预处理：用洗脱液、生理盐水或转印介质等将标本从拭子中洗脱出来，将标本加入试纸顶部，关闭测试卡，根据有无紫红色样品线在15分钟后报告结果。 在有效的试验中，蓝色对照线变为粉红色。
主要成分]。
提供的材料：
1.测试卡：22 份。 它包含对甲型流感病毒核蛋白抗原具有高特异性的单克隆抗体、与胶体金颗粒偶联的甲型流感病毒核蛋白抗原具有高特异性的单克隆抗体、与胶体金颗粒偶联的对乙型流感病毒核蛋白抗原具有高特异性的单克隆抗体、兔抗山羊IgG以及与胶体金颗粒偶联的山羊IgG。
2.移液器：22份，移液器的体积是固定的（100升），用于将样品添加到测试卡中。 仅使用套件随附的移液器或经过校准的移液器，以转移 100 l 样品体积。
3.阳性对照拭子：1份，灭活甲型流感病毒和灭活的哈尔滨乙型流感病毒（即乙型流感病毒）干结合到拭子上。
4.阴性对照拭子：1 份，灭活的 A 组链球菌干燥并与拭子结合。
5.对照拭子洗脱液瓶：2瓶，小瓶中含有约05毫升洗脱液，用于处理测试对照拭子。
不包括但测试所需的组件（单独提供）。
鼻咽拭子配件包：
鼻咽拭子：甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）使用无菌拭子，可以用其他带有弹性手柄的无菌鼻咽拭子代替，详见标本采集和处理部分。
拭子标本洗脱液瓶：1瓶，小瓶含有约05毫升洗脱液，用于拭子标本的预处理以进行测试。 可以使用转印介质或生理盐水代替洗脱液，详见标本采集和处理 - 介质转印部分。
推荐但未提供的材料。
时钟、秒表或秒表;洗鼻液 冲洗液收集器。
储存条件和有效期]。
2 储存在30°C，有效期为24个月。
包装标签上标明了生产日期和有效期。 试剂成分在有效期前相对稳定，禁止使用过期试剂。 打开包装后，应立即将未使用的测试卡放回装有干燥剂的袋子中并密封保存。
样品要求]使用新鲜采集的标本进行检测，标本采集不足或标本处理和运输不当可能导致假阴性结果。
鼻咽拭子。 使用无菌棉、人造纤维、泡沫和带弹性手柄的聚酯鼻咽拭子采集鼻咽标本，不推荐使用钙浴酸拭子进行该试验。 '
在标本采集后 i 小时内洗脱拭子标本并尽快进行检测。 在用该测试盒测试之前洗脱的拭子样本可以储存 2 8 小时，持续 24 小时。 如果需要，试样可以在 2 8 上的防漏容器中运输。
在使用此试剂盒进行测试之前，将所有样品平衡至室温并轻轻旋转混合。
传输介质
以下培养基已经过测试，可用于该试剂盒。
艾米斯中等。
心脑输液。 杜尔贝科的媒介。
汉克平衡盐溶液。
M4 中等。
M4-RT培养基。
M5 中等。
M6 中等。
磷酸盐缓冲液。
盐水斯图尔特'中等。
磷酸酶肉汤。
UTM-RT培养基。
小腿输液。 蔗糖磷酸盐缓冲液已被确定不适合该测定。
试验方法]试样预处理。
用运输介质洗脱鼻咽拭子。
在 05 比 3通过在0ml盐水或转移介质中剧烈搅拌来清洗拭子。 有关可选的转印介质，请参阅标本采集和处理部分。 进入检测程序。
用试剂盒中的洗脱液洗脱拭子（对照拭子和样品拭子）：
2.将待测拭子插入测试瓶中，将拭子在液体中用力转动 3 圈。
3.在从瓶子中取出拭子之前，将拭子挤压在瓶壁上并转动它，使标本从拭子中取出。
4.丢弃拭子。
5.使用该试剂盒尽早检测测试瓶中的液体样品。 进入检测程序。
检测程序。 1.测试前，从袋子中取出测试卡并将其平放在工作台上。
2.挤压移液器上的吸球，将移液器吸头插入试样中，当吸头在试样中时松开吸球，将液体吸入试管中。 确保管子下部没有空气。
3.按照测试卡上的箭头找到试纸上部的白色样品垫，然后缓慢地将整个液体（100μl）从移液器添加到垫的中间，以便所有样品都吸附到垫中。 不要将标本添加到紫红色垫上。
4.立即从测试卡上取下粘性衬里，关闭测试卡，并在 15 分钟内读取。
窗口中的结果。 早于 15 分钟或晚于 15 分钟的结果可能不准确。
注意：读取结果时，如有必要，请倾斜面板以减少结果窗口中的强光。
测试结果的解释]。
对于负面结果，窗口底部的蓝色控制线将变为紫色左侧，而不显示其他线。
pink control line
对于甲型流感阳性标本，蓝色对照线变成紫红色，上面的中间标本线也变成紫红色，只要有标本线，即使颜色很浅，结果也是阳性的。
pink sample line
pink control line
对于乙型流感阳性标本，蓝色对照线变为紫红色，标本上部的标本线也是紫红色，只要有标本线，即使颜色很浅，结果也是阳性。
pink sample line
pink control line
如果控制线仍为蓝色或根本没有出现，则无论试样线是否存在，结果都是无效的。 使用新的测试卡重新测试。
测试方法的局限性]。
阴性结果并不能排除甲型和乙型流感感染的可能性，因此应将甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）获得的结果与临床检查相结合，以做出准确的诊断。 如果需要其他测试来区分甲型和乙型流感病毒的特定亚型或毒株，请咨询您所在国家或地方的卫生部门。
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）可以检测甲型和乙型流感的死病毒和活病毒，检测性能取决于标本中的抗原载量，可能与同一标本的细胞培养结果无关。
甲型和乙型流感病毒靶表位区域氨基酸的微小变化可能导致单克隆抗体检测不到或检测灵敏度降低。
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）用于监测抗病毒**的性能尚未确定。
体外诊断试验的阴性和阳性**值高度依赖于疾病的患病率，假阴性结果更有可能发生在高患病率的高峰期，而假阳性结果更有可能发生在病毒活性低的轻度至中度流行期间。
不建议使用含有肉眼可见血液的标本进行本试剂盒检测。
通过鼻腔吸入接种甲型流感疫苗的个体可在接种快速流感检测试剂盒后三天内发生。
阳性结果。 儿童比成人排出更多的病毒，持续时间更长，因此成人对流感体外诊断的敏感性低于儿童。
产品性能指标]。
期望值
流感流行每年都不同，典型的暴发主要发生在秋季和冬季，流感检测阳性率取决于许多因素，包括标本采集方法、使用的检测方法、地理位置以及特定地区的疾病流行情况。 甲型流感与最严重的流感流行密切相关，而乙型流感则更为温和。 在 2004 年呼吸系统疾病季节和 2004-2005 年呼吸系统疾病季节在美国境外进行的多中心临床研究中，甲型流感的平均患病率为 18%（由病毒细胞培养确定），乙型流感的平均患病率为 3%0
临床表现
在2024年呼吸系统疾病高发季节，在美国以外的中心实验室开展了多中心、前瞻性的临床研究，在2005-2024年呼吸系统疾病高发季节，美国的三个实验机构也进行了同样的研究，通过这些研究建立了甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）的操作特点。 从美国南部、东北部和中东地区的医生实验室、诊所和医院以及瑞典的一家医院的有症状患者身上收集临床标本，并回顾性研究这些冷冻标本。
临床研究
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）检测性能及细胞培养/dfa比较前瞻性研究
从儿童（18岁以下）和**（≥18岁）中共收集了846份标本，并使用甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行了前瞻性评估，并与培养的DFAs进行了比较，其中男性占44%，女性占56%，儿童占54%，*占人口的46%。 患者的性别和年龄对检测结果没有影响，此时的 A H3 和 A H1 是 Kushito 流感的毒株。
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）与细胞培养DFA在标本类型和95%置信区间方面的技术性能比较如下图所示。
带细胞培养的甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）/dfa甲型流感检测性能比较
检测灵敏度
标本++-+灵敏度%95%置信区间。
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）与细胞培养DFA在乙型流感检测性能中的比较。
检测灵敏度试验的特异性
标本 ++—+灵敏度% 95% CI -+—特异性% 95% CI。
鼻咽拭子 2 2 50% 9-91% 346 0 * 99-*
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）与细胞培养DFA检测性能的比较：回顾性研究。
采用甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）对293份冰冻标本进行评价，并与培养的DFA进行比较。 所有标本均采集自美国南部、东北部和中西部地区的医学实验室、诊所和医院，以及瑞典一家医院的有症状患者，53%的检测人群为男性，47%为女性; 未成年人（18岁以下）占62%，成年人（18岁或以上）占38%。 患者的年龄、性别和标本类型对检查结果没有影响。
甲型和乙型乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）和细胞培养DFA在标本类型和95%置信区间方面进行了比较。
甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）与细胞培养DFA在甲型流感检测性能中的比较。
测试灵敏度 测试特异性。
标本 ++A +灵敏度 % 95% CI – +— 特异性 % 95% CI。
鼻咽拭子 19 8 70% 50-86% 77 9 90% 81-95%。
带细胞培养的甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）/dfa乙型流感检测性能比较。
测试灵敏度 测试特异性。
标本 ++—+灵敏度% 95% CI -+—特异性% 95% CI。
鼻咽拭子 0 0 n a n a 111 2 98% 93-*
分析敏感度
该试剂盒的检测限定义为检测 95% 阳性结果的流感病毒浓度。 通过评估北京灭活甲型流感和哈尔滨灭活乙型流感不同浓度的检出限。
12 名操作员对每种浓度进行了 2 次测试，即每个水平测量 24 次。 以下结果确定北京甲型流感的检出限为103 10ng ml，乙型流感在哈尔滨的检出限为605 × 10¹ng/ml。
分析反应性
下列甲型和乙型流感病毒株的浓度在甲型、乙型和抗原检测试剂盒（胶体金法）中呈阳性。 尽管引起人类感染的特定流感毒株每年都不同，但它们都含有该试剂盒检测到的保守核蛋白靶标 2。 在H1和H3亚型流行期间，建立了用于检测人类标本中甲型流感病毒的甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）的操作特征。 作为人类病原体出现的其他甲型流感病毒亚型的实验操作特征尚未确定。
脑膜炎奈瑟菌。
干燥奈瑟菌。
奈瑟菌淡黄色。
寻常变形杆菌。
铜绿假单胞菌。
粘质沙雷氏菌。
金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌（Cowan 蛋白 A 菌株）。
表皮葡萄球菌。
A组链球菌。
B组链球菌。
C组链球菌。
F组链球菌。
变形链球菌。
肺炎链球菌。
干扰物质。 使用甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）在以下浓度下评估呼吸道标本中天然存在的以下物质或人为因素引入鼻腔或鼻咽的物质，未发现对检测性能的影响。 全血 （1%） 并不排除对该试剂盒阴性结果的解释，但排除了对阳性甲型流感标本检测限的解释，因此，血液标本可能不适合该检测。
物质浓度。
4—acetamidophenol omg/ml
乙酰水杨酸 15mg ml
albuterol 20 mg/tril
Zermine 5毫克毫升
美沙芬10毫克毫升
diphenhydramine 5 mg/ml
20 mg/ml
传输介质
以下运输培养基作为阴性标本（不存在病毒）使用甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行检测，并在接种甲型和乙型流感检测限水平后进行检测。 培养基不影响本试剂盒的检测性能，培养基与本试剂盒分开检测时结果为阴性，接种甲型和乙型流感病毒检测限的培养试剂盒检测试剂盒结果为阳性。
心脑输液。 杜尔贝科的媒介。
hank'S 盐平衡溶液。
M4 中等。
M4-RT培养基。
M5 中等。
M6 中等。
磷酸盐缓冲液。
盐水。 stuarfs media
磷酸胰蛋白酶肉汤。
UTM-RT培养基。
小腿输液。 现在已知蔗糖磷酸盐缓冲液不适用于该测定。
可重复的研究
在一项单盲研究中，使用甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）在三个机构随机分配阴性、弱阳性和阳性标本，参与者每天多次检测，持续三天，与预期结果的符合率为 97% （242 250），检测内无显著差异（1 名操作人员重复检测）， 检测之间（三天）、机构之间（三个机构）和操作员之间（六个操作员）。
【注意事项】。
1.体外诊断。
2.使用前将测试卡密封在袋子中。
3.禁止使用过期的试剂盒。
4.禁止混合来自不同套件的成分。
试纸顶部的白色样品垫包含用于从病毒中提取目标抗原的试剂，为了优化操作，将标本缓慢（一滴一滴）添加到试纸垫的中间，以便将所有标本吸入垫中。
用于制作对照拭子的溶液已通过标准方法灭活，但患者标本、参考物质、测试卡等仍应被视为能够传播疾病的物质。
如果根据卫生机构的当代临床和流行病学检测标准*，如果出现新的疑似甲型流感感染，应采取适当的感染控制措施采集致命性新型流感病毒标本，并送往国家或地方卫生部门进行检测。 在这些情况下，除非有 BSL3+（生物安全 3 级）设备可以接收和培养此类标本，否则不要尝试培养病毒。
将移液器中的液体添加到测试卡的样品垫中时，请确保移液器的下部已满且没有气体。 如果存在气体，则将样品排放回容器中; 通过挤压上吸球将标本吸回试管中，并在必要时用新移液器更换。
9.所有移液器和洗脱液瓶均为一次性物品，禁止用于多个样本。
10.当甲型H3和甲型H1是甲型流感病毒的主要传播病毒时，建立了甲型流感病毒的运行特征，其他甲型流感病毒出现后，其他甲型流感病毒的运行特性可能有所不同。
11.该检测方法检测禽流感的能力是使用培养的禽流感病毒确定的，对从感染H5N1或其他禽流感的人身上采集的标本进行的检测的操作特征尚不清楚。