介绍:
CD3D重组蛋白是一种重组蛋白,用于研究和开发与免疫系统相关的疾病。 在本文中,我们将详细介绍CD3D重组蛋白实验的设计和基本信息。
CD3D重组蛋白的基本信息:
常用中文名:CD3D recombinant protein.
亚型:免疫球蛋白超家族蛋白。
基因名: CD3D
基因 ID: 11185
外显子数量:6
分子量:约2.6万道尔顿。
基因本体:CD3 基因家族是 T 细胞受体复合物的组成部分。
货号聚氧乙烯PA1000-5920
参考资料: Schwartz Rh 1990. science. 248(4961):1349-1356.
实验设计:1克隆CD3D基因:
a.获取CD3D基因的DNA序列。
b.将CD3D基因克隆到适当的表达载体中,例如PET-28A(+)。
c.确定克隆的CD3D基因序列是否正确。
2.重组蛋白表达:
a.转化能力强的大肠杆菌(例如,BL21(DE3))。
b.将菌落在LB培养基中培养,并加入适当的抗生素(例如卡那霉素)进行选择。
c.异丙基-D-硫代半乳糖苷 (IPTG) 的添加诱导 CD3D 蛋白的表达。
d.收集细菌溶液并离心。
3.蛋白质纯化:
a.使用细胞破碎溶液提取CD3D蛋白。
b.应用亲和纯化方法,例如使用His标签纯化,使用镍柱。
c.对纯化的蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳,以验证蛋白质的纯度和大小。
4.蛋白质结构鉴定:
a.使用质谱(例如质谱)和蛋白质印迹方法鉴定 CD3D 重组蛋白。
b.进行N端序列测定和质谱分析,以确定蛋白质序列和分子量。
c.可选地,使用圆二色光谱研究蛋白质的二级结构。
5.功能资格:
a.进行体外细胞实验,如淋巴细胞活化试验,以检测CD3D重组蛋白的生物活性。
b.进行动物模型实验以评估CD3D重组蛋白在小鼠实验中的功能和全身作用。
通过上述步骤,我们能够成功合成和表征CD3D重组蛋白,以进一步研究其生物学功能和潜在的临床应用。