CD3d重组蛋白的制备和表征

小夏 科学 更新 2024-02-20

介绍:

CD3D重组蛋白是一种重组蛋白,用于研究和开发与免疫系统相关的疾病。 在本文中,我们将详细介绍CD3D重组蛋白实验的设计和基本信息。

CD3D重组蛋白的基本信息:

常用中文名:CD3D recombinant protein.

亚型:免疫球蛋白超家族蛋白。

基因名: CD3D

基因 ID: 11185

外显子数量:6

分子量:约2.6万道尔顿。

基因本体:CD3 基因家族是 T 细胞受体复合物的组成部分。

货号聚氧乙烯PA1000-5920

参考资料: Schwartz Rh 1990. science. 248(4961):1349-1356.

实验设计:1克隆CD3D基因:

a.获取CD3D基因的DNA序列。

b.将CD3D基因克隆到适当的表达载体中,例如PET-28A(+)。

c.确定克隆的CD3D基因序列是否正确。

2.重组蛋白表达:

a.转化能力强的大肠杆菌(例如,BL21(DE3))。

b.将菌落在LB培养基中培养,并加入适当的抗生素(例如卡那霉素)进行选择。

c.异丙基-D-硫代半乳糖苷 (IPTG) 的添加诱导 CD3D 蛋白的表达。

d.收集细菌溶液并离心。

3.蛋白质纯化:

a.使用细胞破碎溶液提取CD3D蛋白。

b.应用亲和纯化方法,例如使用His标签纯化,使用镍柱。

c.对纯化的蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳,以验证蛋白质的纯度和大小。

4.蛋白质结构鉴定:

a.使用质谱(例如质谱)和蛋白质印迹方法鉴定 CD3D 重组蛋白。

b.进行N端序列测定和质谱分析,以确定蛋白质序列和分子量。

c.可选地,使用圆二色光谱研究蛋白质的二级结构。

5.功能资格:

a.进行体外细胞实验,如淋巴细胞活化试验,以检测CD3D重组蛋白的生物活性。

b.进行动物模型实验以评估CD3D重组蛋白在小鼠实验中的功能和全身作用。

通过上述步骤,我们能够成功合成和表征CD3D重组蛋白,以进一步研究其生物学功能和潜在的临床应用。

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