P450 Qingyun Regentine 靶标文库蛋白

小夏 健康 更新 2024-02-04

细胞色素p450是以血红素为辅因子的酶大超家族,在血红素物质的解毒、药物相互作用和内分泌功能中起着重要作用,是药物靶点,参与多种药物相互作用。

青云瑞晶已经完成了p450家族多种蛋白的表达。 基于这些实验条件和储备蛋白,青云瑞晶将项目的交付时间缩短到1-2个月,确保了项目的顺利交付。

细胞色素P450(CYP)酶是一种广泛存在于微生物、动植物和人体中的膜结合血红蛋白酶,具有氧化、环氧化、羟基化、去甲基化等多种生物催化活性。 作为以血红素为辅因子的酶大超家族,p450 是由许多同工酶和同工型组成的研究最广泛的蛋白质组之一,在药物、类固醇、脂溶性维生素和许多其他类型的化学物质的代谢中具有重要作用。 是异源物质解毒、药物相互作用和内分泌功能等领域的研究热点。

p450酶在不同物种中具有不同的膜结合形式和溶解度。 在原核生物中,CYP450 是可溶性蛋白质。 在真核生物中,它们通常与内质网或线粒体内膜结合。 在哺乳动物中,这些酶氧化类固醇、脂肪酸和外源性物质(例如药物、毒素等),对于去除各种化合物以及激素的合成和分解很重要。 在植物中,这些蛋白质对于防御性次生代谢物、脂肪酸和激素的生物合成很重要。

CYP以血红素卟啉铁为中心,可代谢多种异源物质,与环氧化、羟基化、脱烷基化、脱氨、脱硫、脱卤、亚砜氧化、N-氧化物还原等多种反应有关。 CYP的结构解析对药物的研究和代谢非常重要,而人类CYP是药物的靶点,参与多种药物相互作用,其结构解析大大简化了药物的设计和临床研究。

p450蛋白通常由膜蛋白纯化,在蛋白表达纯化过程中难以获得活性蛋白并分离纯化结合特定辅因子的复合物。 青云瑞晶已经完成了多种p450蛋白的表达和纯化,在该类蛋白的表达和纯化方面积累了一些经验。 同时,为此类项目储备了文献条件结晶的经验,可将项目交付时间缩短至1-2个月,保证项目顺利交付,满足企业药物研发需求。

背景:

CYP11A1 是细胞色素 P450 家族 11A1 (CYP11A1) 的成员,是一种胆固醇-20,22-去糖醇酶(也称为 p450SSC),位于线粒体内膜上,负责孕烯醇酮的产生。 类固醇激素合成的第一步是从胆固醇的侧链中去除6个碳,产生孕烯醇酮; 这是该途径的限速步骤,由三步反应(图1)组成,该反应由体内胆固醇侧链裂解酶催化,因此CYP11A1也是体内唯一催化类固醇激素生物合成第一步的催化酶。 抑制CYP11A1可能会停止所有类固醇激素的合成。

图1CYP11A1催化胆固醇产生孕烯醇酮的反应机理图。

根据CYP11A1蛋白的氨基酸序列信息,CYP11A1蛋白的总长度为521个氨基酸,N端为线粒体内膜定位信号肽,长度约为40个氨基酸,中间P52-F511区域为P450酶的活性域(图2),属于细胞色素p450酶家族, 主要作为氧化类固醇、脂肪酸和外源性物质。在CYP11A1蛋白中,p450酶活性域主要通过氧化还原反应催化胆固醇酮的产生。

图2CYP11A1域分布示意图。

CYP11A1纯化结果:

实验方案参考 doi:

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