细胞是生命结构和功能的基本单位，是各种生命科学研究的基础。 细胞成像的要求是复杂多样的，其中一项挑战是在观察整个细胞周期时稳定焦平面。
今天，我们就来跟随ameya360来“捍卫”细胞成像的焦平面。
同样，有必要了解焦平面漂移的原因，以便更好地稳定焦点和成像。
首先是温度因素。 细胞培养环境要求在37左右，对于高精度成像，细微的热胀冷缩也会显著影响焦平面。
第二个是细胞状态。 细胞培养往往是“娇生惯养”的，当然在成像时要“特别小心”，温度、湿度和CO2浓度一定要严格控制，否则细胞容易发脾气、“打人”、“离壁”，细胞的焦平面也会丢失。
还需要考虑成像参数的影响。 例如，光毒性会导致细胞死亡和烧焦或者，光漂白可能导致荧光猝灭，导致细胞焦平面的损失等。
我们“辛辛苦苦”培育出来的细胞，在数据公布时，面临着如此多的烧焦风险，作为“资深育种者”的我们，又该如何最大程度的避免呢？
1.稳定的成像环境。
为了稳定成像环境，最好在显微镜上安装一个小型培养室，以在成像过程中保持细胞处于良好状态。
从用于加湿、加热和充气活细胞的基本版“小盖”控制系统，到高级版的加热“大盖”控制系统，再到豪华版的全封闭蔡司蔡司通过全自动活细胞成像平台CellDiscoverer 7，提供了一个在数小时到数天的时间尺度上精确控制细胞成像的环境，捕捉健康细胞的动态。
而且我们最好在正式实验前打开环境控制系统，稳定半小时以上（活细胞焦平面稳定时间在4小时左右，有时间的人可以按照这个标准）。
蔡司全自动活细胞成像平台CellDiscoverer 7
2.适当的聚焦策略。
对于分钟及以上拍摄比例的成像，建议添加焦平面稳定系统以锁定焦点。 目前，常用的锁定方法有两种。
使用软件自动对焦锁定焦点。 这种方法是通过在Z轴上扫描样品，然后找到焦平面来执行的，焦平面稍慢，但允许悬浮细胞的焦点，也可以满足特殊样品的焦点要求。
使用“确定对焦”硬件锁定对焦。 该方法聚焦速度快，精度高，是贴壁细胞的理想解决方案。
3.细胞状况良好。
最后，在“焦位面防御战”中，科研伙伴们要像“八仙渡海，各显神通”，千方百计地维持我们细胞稳定的焦位面。 为了防止悬浮细胞漂浮，有的朋友会使用悬浮细胞专用的预制橡胶板来沉降为了在后续实验中顺利锁定焦点，有的朋友提前3-4小时将细胞放入活细胞工作站进行稳定。