患者和样本
该研究包括三名受 HS 影响的患者，他们在接受阿达木单抗**治疗后出现银屑病样病变（每周 40 毫克）和三名受经典斑块状银屑病影响的患者（PASI5 和 10）。在 IDI-IRCCS 地方伦理委员会 （PROT. CE 475 2016），从患者以及活检和血液中收集临床数据。
从 HS 患者现有的银屑病样病变中取出的 8 mm** 活检或 15个月大的牛皮癣斑块。 活检分为免疫组化和**浸润T淋巴细胞分离两部分。 使用 2 ml 外周血样本提取 DNA，而使用 20 ml 样本分离外周血单核细胞 （PBMC）。
免疫组化
用He染色5M石蜡包埋的**切片或进行免疫组织化学处理。 使用的主要抗体如下：抗BDCA2（DDX0043-TDS，树突状，Lyon，France），抗CD15（347420，BD Biosciences，Milan，Italy），抗IL-17A（AF-317-Na），RD Systems（UK），抗淋巴毒素（LT）-SC8302，Santa Cruz Biotechnology，Dallas，TX，USA），抗IL-22（NB100-733，Novus Biologicals，Centennial，CO，USA），抗IFN-（H00056832-M01，NOVA，台湾），抗CD117和抗CD11C（Monx10234和Mon3371，Uden Monosan，荷兰），抗CD68和抗CD3（P02246IT A0452， Darko，格鲁斯特鲁克，丹麦）。以下抗体来自 Abcam（英国剑桥）：抗 IFN- （ab218426）、抗 IL-36 （ab156783）、抗 IFN-1 （ab180616） 和抗 LT-（猫 ab64835）。 使用二氨基联苯胺 HRP 底物开发免疫反应性。 用Mayer苏木精染色切片。
如前所述，从活检和 FACS 分析中分离 T 细胞，从活检样本中分离 T 淋巴细胞。 4-7天后，收集从活检中取出的动物并进行表型鉴定。 淋巴细胞用以下单克隆抗体（mAb）染色：抗IFN--FITC（B27）、-CD4-PE（RPA-T4）、-CD8-Percp（SK1）、-CD3-FITC（HIT3A）（BD Biosciences）;抗TNF--FITC（6N1E7，Miltenyi Biotec，Bergisch，德国），-IL-17-PE（EBIO64DEC17，EbioSciences，法兰克福，德国）;抗IL-22-PERCP（142928，RD系统）。 使用Attune NXT（Life Sciences，Carlsbad，CA，USA）进行采集。 使用Flow逻辑软件（Miltenyi Biotec）进行分析。
统计学
Wilcoxon符号秩检验（sigmastat;San Rafael， CA， USA）用于比较 HS 和银屑病患者活检中 mRNA 含量的差异**。使用未配对的学生'S t 检验计算活检中免疫应答细胞数量差异的显着性。 使用棱镜 v5.对0（GraphPad，La Jolla，CA，USA）进行统计分析，其值表示为平均值+标准差。 p <0.值 05 被认为是重要的。
实时荧光定量PCR分析
使用RecoverAll总核酸分离技术（Life Technologies）从**活检中提取总RNA，并通过实时荧光定量PCR进行分析[27]。 引物组如下：
ifn-α2a，5 [0] tctgctatgaccatgacacgat3 [0]/5 [0] cagcatggtcctctgtaaggg3 [0]；ifn-β，5 [0] cagcaattttcagtgtcagaagc3 [0] / 5 [0] tcatcctgtccttgaggcagt3 [0]；
ifn-λ1，5 [0] aggcttctccaggtgaggga3 [0]/5[0] tcc aggaccttcagcgtcag3 [0]；
ifn-λ2，5 [0] gggcctgtatccagcctcag3 [0]/5[0] gag ccggtacagccaatggt3 [0]；
ifn-λ3，5 [0] gggcctgtatccagcctcag3 [0]/5[0] ggt gcagccaatggtggag3 [0] /；
ll-37，5 [0] ttttgcggaatcttgtaccca3 [0]/5[0] tct cagagcccagaagcctg3 [0]；
gapdh，5 [0] tggacctgacctgccgtcta3 [0]/5[0] ccc tgttgctgtagccaaattc3 [0]。
使用QuantStudio5实时荧光定量PCR系统（Thermo-Fisher Scientific，Waltham，MA，USA）分析样品。
SNP分析
使用QiaCube系统（Qiagen，Hilden，Germany）从血液中提取DNA。 SNP是根据对银屑病与SNPs之间关系或对生物制剂反应的文章的大量综述来选择的。 使用NGS TruSeq定制扩增子试剂盒和MiSeq平台（Illumina，San Diego，CA，USA）通过靶向测序分析SNPpanel。 SNP与补充的SNP一起列在补充材料的表S1中，它们位于所研究的基因组区域附近。 通过读取 50x 的深度和 0 的等位基因频率3. 选择阳性检测。 在HG19上使用Annoval验证了变体的注释。