紫外-可见分光光度法是一种测定190 800 nm波长范围内物质吸光度的方法，用于鉴定、杂质检测和定量测定。 当光通过被测物质的溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长而变化。 因此，通过测量物质在不同波长下的吸光度并将其吸光度绘制为波长的函数来获得被测物质的吸收光谱。 从吸收光谱可以确定最大吸收波长; 最大和最小吸收波长最小值 物质的吸收光谱具有与其结构相关的特性。 因此，可以通过将样品在特定波长范围内的光谱与对照光谱或参考光谱进行比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长的吸光度比来识别物质。 定量时，在最大吸收波长下测定一定浓度的试样溶液的吸光度，将某浓度的对照溶液的吸光度与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较，或用吸收系数法计算试样溶液的浓度。
仪器的校准和验证。
1.波长。
由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长往往略有变化，因此除了对所使用的仪器进行定期的综合校准外，测量前还应对被测波长进行校准。 常用汞灯中更强的光谱线23783nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，334.15nm，365.02nm，404.66nm，435.83nm，546.07nm 与 57696nm；或与仪器中的氘灯486配合使用02nm 与 656用于校正的L0nm光谱线; 波长为 279 的钬玻璃4nm，287.5nm，333.7nm，360.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm 与 637在5nm处有尖锐的吸收峰，也可用于波长校正，但由于随时间变化不同**或略有变化，使用时应注意; 近年来，双光束仪器常采用高氯酸钬溶液进行校准，以10%高氯酸溶液为溶剂制备含4%氧化钬（Ho2O3）的溶液，溶液吸收峰波长为24113nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm 和 64052nm。
仪器波长的允许误差为：lnm在紫外光区，2nm在500nm左右。
2.吸光度的准确性。
可鉴别为重铬酸钾的硫酸溶液。 取基准重铬酸钾在120下干燥至恒重约60mg，精密称定，用0将005mol l硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，按规定波长测定并计算其吸收系数，与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。
3.杂散光的检查。
可将下表所列试剂和浓度配制成水溶液，置于1cm石英吸收池中，在规定的波长下测定透射率，应符合表中的规定。
对溶剂的要求。
含有杂原子的有机溶剂通常具有很强的末端吸收。 因此，当用作溶剂时，它们不应在小于截止波长的范围内使用。 例如，甲醇和乙醇的截止波长为205nm。 此外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。 因此，在测量测试样品之前，需要检查所用溶剂是否符合测试样品所用波长附近的要求，即将溶剂置于1cm的石英吸收池中，以空气为空白测定吸光度（即空白光路中不放置任何物质）。 溶剂和吸收池的吸光度在220 240nm范围内不得超过040、在241 250nm范围内，不得超过020.在251 300nm范围内，不得超过010、300nm以上时，不应超过005。
测定。 测定时，除另有规定外，应采用用于配制供试品溶液的同一批溶剂作为空白对照，使用LCM的石英吸收池在规定的2nm吸收峰波长内测量若干点的吸光度，或仪器在规定波长附近自动扫描测量，检查供试样的吸收峰波长位置是否正确。 除另有规定外，品种下规定的吸收峰波长应在2nm以内，应以吸光度最高的波长为波长。 通常，供试品溶液的吸光度读数取03～0.7. 仪器狭缝带宽度应小于供试样吸收带半高宽度的1 10，否则测得的吸光度会很低; 狭缝宽度的选择应基于以下事实：当狭缝宽度减小时，测试样品的吸光度不会增加。 由于吸收池和溶剂本身可能存在空白吸收，因此应在确定供试样的吸光度后减去空白读数，或在计算含量前由仪器自动扣除空白读数。
当溶液的pH值对测定结果有影响时，供试品溶液的pH值与对照品溶液的pH值应一致。
1.鉴定和检验应按照每个品种规定的方法进行。
2.含量测定一般有以下几种方法。
1）对照品的比较法 照各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，供试品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中测定成分规定量的100% 10%，所用溶剂也应完全一致， 测定供试品溶液与对照品溶液在规定波长处的吸光度后，按以下公式计算供试品中被测溶液的浓度：
cx = （ax/ar）cr
式中，cx为供试品溶液的浓度;
ax为供试品溶液的吸光度;
CR为对照品溶液的浓度;
AR是对照品溶液的吸光度。
2）吸收系数法 按各品种下的方法配制供试品溶液，测定其在规定波长处的吸光度，然后用该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用这种方法测量时，吸收系数通常应大于100，并应注意仪器的校准和检定。
3）计算分光光度法 分光光度法的计算种类很多，应按各品种规定的方法进行使用。当在吸收曲线急剧上升或下降的点测量吸光度时，波长的微小变化可能会对测量结果产生重大影响，因此参比样品和测试样品的测试条件应尽可能一致。 计算分光光度法通常不适用于含量测定。
4）比色法 供试品本身在紫外-可见光区没有很强的吸收，或者虽然在紫外区有吸收，但为了避免干扰或提高灵敏度，可以加入适当的显色剂，使反应产物的最大吸收向可见光区移动，这种测定方法称为比色法。
用比色法测定时，由于显色过程中影响显色深度的因素很多，因此供试品应与对照品或标准品同时操作。 除另有说明外，比色法所用空白是指用相同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，以同样的方式处理。 测定对照品与供试品溶液在规定波长下的吸光度后，按上述方法（1）计算供试品的浓度。
当吸光度与浓度的关系线性不好时，应取若梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至相同体积，显色后测定各溶液的吸光度，然后用吸光度和相应的浓度绘制标准曲线，然后根据供试品的吸光度在标准曲线上找到相应的浓度样品，应获得其含量。