你知道的传代培养程序是吗？
传代培养是通过将细胞从原始培养瓶中分离出来并将它们转移到新培养瓶中进行培养来完成的。 这个过程也被称为传代培养细胞。 通过传代培养，细胞扩增形成细胞系，便于细胞克隆和保存，为科学研究提供大量实验材料。
特定传代培养程序如下：
1.去除原始营养液：从烧瓶中倒入或取出旧培养液。
2.消化细胞：在烧瓶中加入少量混合胰蛋白酶溶液和EDTA溶液，以覆盖烧瓶底部。 将烧瓶置于适当的温度下（培养箱在37或室温在25）进行消化。 观察细胞的变化，一旦发现胞质回缩和细胞间隙增加，立即停止消化。
3.冲洗细胞：吸出消化物，加入少量Hanks溶液，轻轻转动烧瓶，冲洗剩余的消化物，然后加入培养基。 如果只用胰蛋白酶消化，可以吸出胰蛋白酶溶液，直接加入含血清的培养物，停止消化。
4.分离细胞：使用肘部移液器轻轻敲击烧瓶壁上的细胞，反复敲击它们以脱离烧瓶壁并形成细胞悬浮液。 轻拍时要轻柔，以防止对细胞造成损害。
5.接种细胞：用载玻片计数后，将细胞接种到新烧瓶中，并置于 CO2 培养箱中进行固化。
6.更换培养基：根据细胞生长状态和实验要求，确定更换培养基的时间。 一般来说，每2-3天更换一次培养基。
7.一旦细胞覆盖了容器的底部，它们就可以用于实验，或者可以继续进行遗传和维持以扩大规模，或者可以用培养基代替它们。
传代培养时应注意以下几点：
1.控制细胞消化时间：时间太短会使细胞难以从烧瓶壁上分离，时间过长会导致细胞脱落受损。
2.控制消化液浓度：浓度过高时，应缩短消化时间;当浓度过低时，细胞消化时间相对较长。
初代培养成功后，随着培养时间的延长和细胞的**，细胞之间会发生接触抑制，生长速度会减慢甚至停滞。 此外，营养缺乏和代谢物积累也可能对细胞生长或毒性有害。 因此，需要传代培养，在传代培养细胞时，需要严格遵循传代培养程序和注意事项，以获得理想的实验结果。