NK细胞概述：
自然杀伤（NK）细胞属于先天淋巴细胞家族，在人类中通常定义为CD3-CD56+细胞，占循环淋巴细胞的5%至15%。 NK细胞是抵御病毒感染和细胞突变的第一道防线，无需事先致敏即可杀死威胁宿主的癌细胞、同种异体细胞和感染外来病原体的细胞，被认为是癌症免疫监视、移植排斥反应和早期病毒免疫的关键效应细胞。
图 NK细胞（黄色）和癌细胞（红色）。
nk细胞免疫
CAT免疫的成功激发了研究人员利用其他免疫细胞治疗癌症的兴趣，简单来说，细胞免疫就是收集人体自身免疫细胞，经过体外培养后将其数量成倍增加，然后将它们输回人体，一方面消除癌细胞、突变细胞，另一方面， 激活和增强机体免疫力，控制癌细胞转移和**。与CAT-T**相比，NK**可靶向多种致病抗原，细胞毒性更强，且不分泌引发细胞因子释放综合征（CRS）的主要细胞因子，可大大降低不良反应风险，备受期待。
NK细胞的主要策略**：
体外活化的自体或同种异体NK细胞、NK细胞和单克隆抗体（例如免疫检查点抑制剂）联合用于诱导抗体特异性细胞毒性（例如抗EGFR西妥昔单抗）、CAR-NK细胞免疫**等。
目前市面上尚无NK细胞**，但其临床试验正在如火如荼地进行中，截至11月，“NK细胞”的搜索结果已高达720例，NK细胞**在急性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征、神经母细胞瘤、胃癌等实体瘤中均显示出良好的效果。 肝癌、肺癌和肠癌。
图 在ClinicalTrials中搜索结果： “NK细胞”
体外扩增NK细胞**：
除了从自体或同种异体外周血中分离NK细胞外，还可以从脐带血和干细胞分化中获得NK细胞，此外，由于以上三种方式获取细胞的方式繁琐，在CAT-NK的研究中，许多研究人员使用NK-92进行进一步修饰，在临床前研究中取得了良好的效果， 值得注意的是，细胞在输注前需要照射。
人外周血NK细胞的分离纯化方案：
制备：15ml离心管（ABS7102）或锥形管，HANK'S溶液（ABS9257）或PBS（ABS962），人淋巴细胞分离溶液（ABS930）。
图 Abics 人淋巴细胞分离溶液 （ABS930）。
1. 获取PBMC
1）准备无菌15ml离心管或锥形管;
2）加入淋巴细胞分离液5ml;（注意：淋巴细胞分离器在使用前应恢复到室温，18-25）。
3）hank'S溶液（ABS9257）或PBS（ABS962）缓冲液按1：1比例稀释（如果全血样本粘稠，可适当增加比例）稀释抗凝全血样本;
4）小心地将新鲜稀释的4ml全血样品加入淋巴细胞氢化蓟酸盐的顶部，沿着壁管非常缓慢地靠近分离层;（注意：切记不要弄浑淋巴细胞分离器）。
5）小心放入离心机（摆出式转子），4离心20-30min，转速为400g-1000g;（注意：应拆下离心机制动器并等待自然停止）。
6）小心取出管子，切记不要振动;
7）上层为淡红色透明等离子体，其后为致密白色细环，即PBMC;
8）吸出上清液后，轻轻吸出血沉棕黄层，转移到新的离心管中;
9）用PBS重悬，室温离心，300g，10min，重复操作2次，弃去上清液，用少量PBS重悬。
2. NK细胞的纯化
NK细胞纯化最常用的方法是磁珠分选，包括阳性分选和阴性分选，人NK细胞的发育阶段主要基于CD34、CD117、CD56和CD94的表达水平。 CD56、CD56 表达增加是 NK 成熟的关键CD16+可以识别和分离未被其他淋巴细胞污染的NK细胞。 此外，白细胞介素2 15受体（CD122）也是NK细胞发育后期的重要标志物。
3. NK细胞培养
1）将纯化的NK细胞重悬于免疫细胞无血清培养基（ABS9772）中，并以一定密度接种在培养皿或培养瓶中。
2）在免疫细胞的无血清培养基中加入100-200IU ml的IL-2，保证NK细胞的增殖和活化，有助于改善细胞毒性，与IL-15合用可促进NK细胞增殖，促进NK细胞活化。
3）将细胞在37的培养箱中培养至少48小时，然后进行细胞功能鉴定等后续实验。
名词的一般解释：
阳性筛查：磁珠结合表面标记物，这些标记物需要筛选细胞以进行纯化。
阴性筛查：采用磁珠结合等手段去除混合细胞中除目标细胞外的其他细胞，达到纯化的目的。
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引用
1] 米锦涛;袁成良. NK细胞相关免疫检查点及其抑制剂的研究进展[J].现代癌症学杂志， 2023， 31（24）： 4645-4650
2] shimasaki n, jain a, campana d. nk cells for cancer immunotherapy[j]. nature reviews drug discovery, 2020, 19(3): 200-218.