瞬时转染与稳定转染

瞬时转染和稳定转染，两者都将目的基因转染到特定的哺乳动物细胞中以表达目的蛋白。 但是，这两种方法在原理和操作过程上有所不同。

1、实验原理：

瞬时转染原理：外源基因不是转染到细胞的染色体中，而是存在于游离载体上，这样就可以在短时间内获得基因的表达产物，但随着细胞的不断增殖，外源基因最终会丢失，重组蛋白的生产无法继续。

稳定转染原理：将外源基因转染到细胞染色体中，目的基因不会随着细胞传代而消失，可以长期稳定生产目的蛋白。 稳定的转染（稳定的细胞系构建）可实现重组蛋白的长期稳定生产。

2. 步骤。

1.用于瞬时转染和稳定转染的质粒不同，瞬时质粒不需要抗性，用于稳定转染的质粒必须具有特异性抗性，以便于后续克隆筛选。 此外，两者使用的介质和实验试剂也不同。

2.瞬时转染的操作比构建稳定的细胞系更简单，在构建质粒后经过细胞回收、转染、细胞培养、蛋白纯化等步骤即可获得目标蛋白要构建稳定的细胞系，需要将构建的质粒线性化，然后进入培养的哺乳动物细胞，通过一定的转染方法实现质粒与细胞的融合，然后经过细胞池筛选、单克隆筛选、细胞传代培养等步骤，获得稳定的转染细胞系。 培养稳定的细胞系可长期稳定地生产目标蛋白。

3.特点：瞬时转染：可快速产生痕量至中等量的重组蛋白实验成本低;一台主机可以携带多个副本，效率高。

稳定细胞株构建：靶蛋白长期稳定生产;获得稳定转染后，后续蛋白生产成本降低;它可以执行基因插入和基因敲除等编辑操作。

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