抗体是指浆细胞在抗原的刺激下被B淋巴细胞分化产生的免疫球蛋白,能特异性地与相应的抗原结合。 所以在实验中,用于WB、IP、IHC、IF、CHIP之抗体之间有什么区别?
Western blot(WB)是生命科学领域非常常用的分子生物学实验技术,其原理是利用SDS-PAGE分离蛋白质,然后将蛋白质转移到膜上,然后使用抗体检测蛋白质。 在实验过程中,由于电泳前蛋白质的热变性,蛋白质被线性化,破坏了维持蛋白质二级和**结构的氢键,需要识别线性表位的抗体。 因此,WB抗体一般是以合成肽为抗原制备的。
IHC(免疫组化)是一种利用标记抗体通过抗原抗体特异性免疫反应和化学荧光颜色反应来研究细胞或组织中抗原的技术。 在免疫组化实验过程中,需要对组织或细胞进行固定,以保持细胞形态和结构在其天然状态下的一致性,并保证组织细胞抗原特异性的稳定性。 但是,化学物质的固定化会使蛋白质变性,这将不同于其天然状态下的蛋白质结构,也不同于WB中的加热和变性结构。
因此,在IHC IF实验中,最合适的是以重组蛋白为抗原制备的抗体,也可以采用人工合成多肽作为抗原制备抗体。 如果抗体用于识别线性表位(例如,蛋白质上连续的几个氨基酸),则该抗体可用于 IHC 和 WB,而如果抗体识别构象表位,则只能用于 IHC。
IP(免疫沉淀):一种通过抗原和抗体的特异性反应纯化和富集样品中目标蛋白的方法。 通常,靶蛋白及其相应的抗体(蛋白A G)通过形成免疫复合物而沉淀。 IP技术根据检测目标的不同可分为以下三种类型:chip、RIP和co-LP。 Chip是利用IP技术检测富集后与蛋白质结合的DNA量RIP 是检测到的与其结合的 RNA 量;Co-IP 是测量到它结合的蛋白质量。
免疫沉淀是利用抗体来识别和结合天然状态下的蛋白质,因此在做IP实验时最好选择以天然蛋白制备的抗体作为抗原,当然也可以选择以重组蛋白作为抗原制备的抗体。
就是这样用于WB、IP、IHC、IF、CHIP之抗体之间有什么区别?