蛋白质纯化是将目标蛋白质与混合物中的其他杂质分离的过程。 以下是常见的蛋白质纯化程序:
细胞裂解:通过物理或化学手段破坏细胞膜以释放蛋白质。
预处理:去除细胞碎片、核酸、脂质等杂质。 可采用沉淀、过滤、超速离心等方法。
分离:根据蛋白质的理化性质,选择合适的分离方法。 常用方法包括:
电泳:基于蛋白质电荷、大小或质量的差异进行分离。
层析:利用分子量、电荷、亲和力等性质选择合适的层析介质,如离子交换层析、凝胶过滤层析、金属螯合层析等。
电泳同位素标记:同位素标记应用于目标蛋白质,并利用其物理或化学特性进行分离。
浓缩:浓缩目标蛋白质的溶液以去除溶液中过大的物质。
纯化:采用重层析或其他纯化方法进一步去除杂质,以获得更高纯度的目标蛋白。
测定纯度和活性:使用蛋白质定量方法和功能测定法测定蛋白质的纯度和活性。
储存:对纯化的蛋白质进行适当的冻干或冻存,以确保其稳定性和长期储存。
需要根据目标蛋白的特性和杂质的性质选择合适的纯化策略和方法。 纯化过程可能因蛋白质而异。
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